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时间:2019-06-25
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1、实验五血清总胆固醇测定【实验目的】学习血清总胆固醇测定的实验原理。掌握总胆固醇的测定方法和操作技术。【实验原理】血清脂类包括甘油三酯、胆固醇、胆固醇酯、磷脂、糖脂、游离脂肪酸。它们在血液中以脂蛋白(脂和载脂蛋白的复合体)的形式存在。用超速离心技术可把血浆脂蛋白分成四大族:CM、VLDL、LDL、HDL,用电泳技术可把血浆脂蛋白分成α-脂蛋白、前β-脂蛋白、β-脂蛋白、CM。血清中总胆固醇(TC)包括游离胆固醇FC和胆固醇酯(CE)两部分。胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA),胆固
2、醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成Δ4-胆甾烯酮和过氧化氢,H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时,经过氧化物酶催化,反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物,其颜色深浅与标本中TC含量成正比。【试剂与器材】1.总胆固醇测定试剂盒2.酶标板、板条、微量进样器、微量移液器3.生化培养箱、酶标仪4.血清【操作步骤】配制工作试剂:R1取4.5ml,R2取0.5ml,置于10ml玻璃试管中取酶标板1块,板条1条,按下表操作:3.置于37℃生化培养箱10min,492nm波长处在酶标仪上读取各管的吸光度A。结果与计算血
3、清总胆固醇=测定管吸光度平均值标准管吸光度平均值×标准物浓度【参考值】:胆固醇:血清参考值:3~5.20mmo1/L;危险阈值:5.20~6.20mmol/L;高胆固醇血症:>6.20mmo1/L。【临床意义】---了解TC增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性apoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。TC降低常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严
4、重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病,如癌症晚期等。【注意事项】胆固醇:标本采集:空腹12h采血,避免溶血。可用下列抗凝剂,直至所列浓度对结果没有明显影响,EDTA25mg/ml;枸橼酸钠50mg/ml;草酸盐50mg/ml;肝素2mg/ml;氟化物10mg/ml。标本保存:血清胆固醇在室温(25℃)或2-8℃冷藏可稳定7天,在-20℃密集冷冻可稳定数月,血浆中胆固醇稳定性同血清。【思考题】一、简述双缩脲法测定蛋白质含量的原理二、简述血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的原理三
5、、简述酶法测定血糖的原理四、Km的意义?五、简述酶法测定血清总胆固醇的基本原理。
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