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时间：2019-06-29
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1、技能训练10 传染性法氏囊病卵黄抗体效价的测定掌握鸡传染性法氏囊病卵黄抗体效价的测定方法实训目标氯化钠、琼脂粉、培养皿、打孔器、酒精灯、鸡蛋、96孔血凝板、微量移液器、烧杯、带盖瓷盘、注射器、生理盐水、蒸馏水、标准抗原等仪器设备方法步骤（一）1%琼脂平板制备（二）稀释卵黄（三）加样（四）反应（一）1%琼脂平板制备1.制板：用8～10%氯化钠溶液配制1%琼脂溶液，电炉加热使之充分溶化后，倒入直径90mm培养皿，制成厚度为2.5～3mm琼脂平板；平置，在室温下冷却凝固后打孔。2.打孔：在琼脂板上按7孔一组的梅花形打孔（中间1孔，
2、周围6孔），孔径5mm，孔距2～5mm，将孔内的琼脂用8号针头斜面向上轻轻将琼脂挑出，勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。一般打孔两组。3.封底：用酒精灯轻烤平皿底部至微烫，封闭孔底部，以防侧漏。4.编号：在平皿底用蜡笔编号，第一组编号1～6，第二组编号7～12。（二）稀释卵黄先用微量移液器在96孔血凝板加生理盐水，每孔50微升，共加1~12孔；再于第一孔加50微升卵黄，倍比稀释至12孔。（三）加样中央孔加入传染性法氏囊病病毒标准抗原，加样量以“满而不溢”为原则。用微量移液器小心的将96孔血凝板中不同浓度卵黄液小心加至琼扩板的周边孔上
3、，血凝板孔号与琼扩板孔号要一一对应，加样从低浓度开始加样，每加一个浓度，吸嘴尽量喷干净（四）反应将琼扩板静置1～2min，加盖、倒置入湿盒中，放入37℃的温箱中24～48h。（五）结果判断24～48h后，观察出现白色沉淀线的卵黄稀释度，即是IBD抗体效价。课后作业1.写出实习报告；2.掌握IBD卵黄抗体的检测方法。
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