农残快速检测法生化法

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1、湖南省农产品质检中心李拥兵蔬菜上农药残毒快速检测技术（生化法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药）1速测法最低检出浓度最高残留限量引起中毒的残留浓度低浓度高浓度仪器最低检出浓度2试剂提取试剂磷酸缓冲液(磷酸氢二钠+磷酸二氢钾)PH-8胆碱酯酶底物碘化硫代乙酰胆碱(ATCI)碘化硫代丁酰胆碱(BTCI)显色剂：二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)（乙酰胆碱酯酶或丁酰胆碱酯酶）3试剂的保存酶：粉状的酶应保存在冷冻室内（约-18度），用时用缓冲液（提取液）溶解，溶解后的酶液分成2-4小瓶，暂时不用的储存在冷冻室内，用时解冻，解冻后的酶液贮存在冷藏室内（0-5度），酶液用后及时放回冰箱中冷藏，最好在一周内用完，反

2、复解冻不能超过两次，否则会影响酶的活性。底物：固体及溶解后的底物均应保存在冷藏室内。显色剂：固体及溶解后的显色剂均应保存在冷藏室内（0-5度）。提取试剂：固体及溶解后的缓冲液只需在常温下保存。速测卡：未开封的速测卡可在常温干燥下保存半年，10℃下保存一年。每小包速测卡开封后须在三天内用完，应密封保存。4检测原理在对农药残留的检测中，如果蔬菜的提取液中不含有有机磷和氨基甲酸酯类的农药残留或残留量较低，酶的活性就不会被抑制，试验中加入的基质就被酶水解或少部分水解，水解产物与加入的显色剂反应产生颜色。反之，如果蔬菜的提取液中含有一定量的有机磷或氨基甲酸酯类农药，酶的活性就被抑制，试验中加入的

3、基质就不能被酶水解，从而不显色或颜色变化很小，用分光光度计来测定反应前后吸光值的变化，计算出抑制率，就可以判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酯农药的残毒情况。5反应方程式（以丁酰胆碱酯酶为例）1、（CH3）3NCH2CH2SCC3H9O（硫代丁酰胆碱）+H2OBchE37-380C（CH3）3NCH2CH2SH(硫代胆碱）+C3H9COOH(丁酸）2、（CH3）3NCH2CH2SH(硫代胆碱）+显色剂黄色物质底物酶6生化法检测原理酶+有机磷或氨基甲酸酯类农药酶被抑制酶+样本提取液酶活被抑制含有机磷或氨基甲酸酯类农药活性正常不含有机磷类或氨基甲酸酯类农药酶+拟除虫菊酯类农药酶活不被抑制7分光光度法仪器

4、•分光光度计(RP-410或RP-420)•电子天平•微型混合器•培养箱•移液枪•取样器•其他配件8检测过程取2克样本（非叶菜取4克），切碎加入20毫升提取试剂，震荡1-2分钟倒出上清液，静置3-5分钟试管或比色杯中加入50微升酶、3毫升样本提取液、50微升显色剂.在37-38C下培养30分钟.于待测的5只试管或比色杯内加入50微升底物，于412纳米波长下比色。9452301前后样品池5样品池3样品池1样品池4样品池20位池，调仪器状态，要空置附1:RP-410型仪器样品室平面图：10吸光值A1A2CS1S2S3S4抑制率R1R2R3R43分钟前吸光值空白吸光值样本吸光值抑制率附2：打印结果

5、说明（1）、检测1个空白、4个样本打印结果如下3分钟后吸光值11吸光值A1A2CS1S2S3S4S5抑制率R1R2R3R4R53分钟前吸光值空白吸光值样本吸光值抑制率3分钟后吸光值（2）、检测5个样本打印结果如下12抑制率%=Inhibition%C-SC×100%抑制率%：酶被抑制的程度C:对照组3分钟前后吸光度值之差S:样本3分钟前后吸光度值之差*对照组的比色杯中用3毫升提取试剂代替样本提取液.结果计算13结果判定抑制率<70%（阴性）合格检测结果以抑制率（%）表示抑制率70%（阳性）根据市场管理规定处理用GC进一步定性定量分析至少要2次以上重复检测确认14速测卡法仪器设备及试剂•PR-

6、3A农残速测仪•电子天平•速测卡•取样器•其他配件15检测过程取5克样本，剪碎，放入烧杯中，加入10毫升纯净水，搅动接通电源，打开PR-3A农残速测仪，预热10分钟，使之达到反应设定的温度（39℃）将速测卡沿中线对折，揭去速测卡保护膜，插入速测卡（红色药片向上，白色药片置于加热器上），然后在白色药片上滴两滴提取液。按“确认”，不要合盖，进入第一次反应倒计时。反应倒计时进入一半时，根据提示检查是否需要加入提取液。.反应完毕，合盖进入显色反应。显色反应完毕后，取出卡片，判读结果16结果判定试纸显示蓝色合格以试纸显示颜色为判断标准白色为阳性根据市场管理规定处理用GC进一步定性定量分析至少要2次以上重

7、复检测确认17速测卡片法中注意事项1、每批测定应设一个洗脱液或纯净水的空白对照卡，样品放置的时间应与空白对照卡放置的时间一致才有可比性。2、空白对照卡不变色的原因：一是药片表面缓冲液加得太少，预反应后的药片表面不够湿润；二是反应温度太低。3、放置10分钟进行预反应，预反应后药片表面必须保持湿润。白色药片上水份不能蒸干，否则会出现假阳性。4、红色药片和白色药片叠合反应的时间为3分钟。3分钟后蓝色会逐