小鼠实验方案

《小鼠实验方案》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、酵母提取物对小鼠肝损伤保护作用试验方案酵母提取物抗氧化能力的测定概述：自由基是指是机体代谢的正常产物，在体内有很强的氧化反应能力，可以在细胞代谢的过程中不断地产生。大量的研究结果证明，自由基是衰老的决定因素。在生命活动过程中产生的各种自由基中轻自由基的作用最强，进攻性也最强，几乎可以和所有的生物分子、有机物或无机物发生不同类型的化学反应。超氧阴离子不仅自身具有毒性，而且可以通过其他反应产生更多的氧自由基，进一步对生物体产生损伤作用。试验拟采用DPPH自由基体系、超氧阴离子(O2-)自由基体系、羟自由基(HO-)体系以及还原力测定体系评价酵母提取物的抗氧化活性。试验方法1）DPPH自由基清除

2、试验DPPH储备液配制：精密称取19.7mgDPPH溶解于25mL甲醇中，再吸取2.5mL溶液，以甲醇补足体积至25mL，得到200µMDPPH母液，暗处保存备用。药品及对照品储备液配制：酵母提取物采用甲醇溶解，得到终浓度为1mM的母液。再将母液加甲醇稀释至一定浓度梯度，加3mL于比色管中（对照组加入3mL甲醇或水），再加入1mLDPPH母液，剧烈震荡后，与暗处保存30min，以甲醇做空白，测其517nm吸光值。以Vc作为阳性对照，各组反应平行测定三次，DPPH自由基清除率按照下面公式计算：DPPH自由基清除率（%）=A0-A1A0×100式中A0代表对照组的吸光值；A1代表加药组的吸光值

3、。2）超氧阴离子(O2-)自由基清除试验采用NADH-PMS方法评估酵母提取物对超氧阴离子自由基的清除能力。试管中依次加入1mLNBT(81µM)溶液，1mLNADH(468µM)溶液，1mL不同浓度的待测溶液，0.4mLPMS(88µM)溶液，充分混匀，静置5min，在560nm处测其吸光值。用水代替待测溶液做阴性对照，水代替PMS做本底组对照，Vc做阳性对照。清除率计算:清除率(%)=[1-((Aa-Ab)/A0]X100%式中Aa为样品吸光值，Ab为样品吸光值，A0为阴性对照值。3）羟自由基(HO-)清除试验本实验参照文献等提供的方法评估PEP对羟自由基的清除能力。反应液的配制:10

4、0mL的磷酸盐缓冲液(20mMpH7.4)中加入EDTA,FeC13和DR(终浓度分别为0.1mM,0.1mM和2.8mM)。测定时，取反应液1.5mL，依次加入0.1mLVC(1mM)、0.35mLH2O2(20mM)及1mL不同浓度的样品溶液，37℃水浴。20min后，加入1mLTBA(1%)和3mLTCA(2.8%)，90℃水浴，15min后，532nm处测定吸光值。D-Mannitol做阳性对照。清除率的计算:清除率(%)=[1-((Aa-Ab)/A0]X100%式中Aa为样品吸光值，Ab为样品吸光值，A0为阴性对照值。酵母提取物对小鼠肝损伤保护作用试验四氯化碳是一种强有力的肝毒素

5、，被广泛用于诱导肝脏损伤的实验动物，本身对肝细胞没有毒性效应，但其受到肝微粒体酶活化成为CCL3.，以共价形式与蛋白质结合，导致蛋白合成障碍，脂质分解代谢紊乱，引起肝细胞内甘油三酯蓄积，同时CCL3*能迅速与氧气结合转化为CCL3OO*，导致脂质过氧化，引起细胞膜变性甚至坏死。ALT和AST主要存在于肝细胞内，当肝脏发生损伤、坏死或受到破坏时，就会引起谷丙转氨酶和谷草转氨酶在血清中浓度会偏高，ALT和AST是迄今为止国内外应用最为广泛的反映肝细胞损害的指标。TC和TG是临床血脂分析的重要指标，当肝细胞受损时二者的含量将会升高。丙二酸（MDA）在体内是自然生成的，是氧化应激的标志物，MDA增

6、加的越多可以间接反映机体细胞受到自由基攻击的程度越大。谷胱甘肽（GSH）是体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，具有解毒和抗氧化能力，对肝脏有重要的保护作用，当肝细胞或者机体受到损伤时组织和血液里的含量就会降低；超氧化物在超氧化物歧化酶（SOD）催化作用下转化为氧气和过氧化氧，能清除超氧阴离子自由基，可见SOD具有使机体的超氧化物减少的作用，进而达到保护细胞的作用;谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）是机体内的一种重要的可以促进过氧化物分解的酶，它可以将体内的过氧化物进行分解，从而减轻机体或者组织受自由基或过氧化物带来的损害；在所有的机体内都存在着酶促反应体系和非酶促反应体系两种反应类型，这两种

7、反应类型当然也涉及到了机体抗氧化的反应类型。总抗氧化能力（T-AOC）反映了机体酶促反应体系和非酶促反应体系总的抗氧化水平的指标,当机体或者组织受到伤害时就会使T-AOC的活性水平降低。当肝脏受到损伤时，GSH、SOD、GSH-PX和T-AOC含量的都会不同程度的降低。试验动物：昆明小鼠60只，雄性，体重18~22g。试验试剂：酵母提取物，联苯双酯配制成10mg/ml的溶液。四氯化碳、花生油。谷丙转氨酶（ALT），谷草转