柠檬酸酒精综合实验

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1、微生物发酵工程部分Ⅰ柠檬酸产生菌的分离、发酵、分析、提取及检测（好氧发酵部分）Ⅱ酒精及酒类方面的综合实验（厌氧发酵部分）生物技术专业系统实验二生物技术专业系统实验二（微生物发酵工程部分）云南大学生命科学学院生物技术系张理珉微生物发酵工程实验一柠檬酸产生菌的分离及初筛实验二柠檬酸产生菌的复筛实验三应用正交实验法优选柠檬酸产生菌的最佳发酵培养基实验四柠檬酸产生菌的发酵实验五柠檬酸的提取实验六柠檬酸发酵产物及提取产品的检测、鉴定微生物发酵工程是一门利用微生物科学和工程学的原理去研究微生物在生物反应器中工艺特点和生长规律的学科。主要研究微生物细胞中

2、复杂的生物化学反应，控制生物合成或降解、大规模地生产预期的产物，达到特殊的目的。其应用范围广泛，包括医药、食品、粮食、饲料、农业、林业、化工、化纤、冶金、能源、环保等方面。微生物发酵工程实验是在学习了有机化学、微生物学相关知识、微生物发酵工程中的工艺设备后，并具备一定的实验动手能力基础上，通过微生物发酵工程实验课程的教学，使学生了解并掌握微生物发酵工程中所涉及的发酵工艺、设备、分析等几方面的知识及实验技能。Ⅰ柠檬酸产生菌的分离、发酵、分析、提取及检测（好氧发酵部分）柠檬酸生产介绍柠檬酸又名枸橼酸，它是存在于柠檬等水果中的一种有机酸。学名为3

3、-羟基3-羧基戊二酸。柠檬酸具有令人愉快的酸味，它入口爽快，无后酸味，安全无毒，是发酵法生产的最重要有机酸。它在水中的溶解度极高，能被生物体直接吸收代谢。它的许多特殊优点使它在各个工业部门得到了广泛的应用。柠檬酸的盐类和衍生物也各具优点，用途广泛，在国民经济中占有重要地位。本实验通以柠檬酸产生菌黑曲霉为代表，学习工业微生物的分离、初筛、复筛、正交实验、发酵罐发酵、产物提取及鉴定等实验，使学生较全面系统地掌握微生物发酵工程的基本实验方法和技能。实验的总体路线土壤稀释分离变色圈平板挑菌纯化摇瓶初筛产物鉴定复筛正交实验重复实验发酵罐发酵产物提取产

4、品鉴定实验一柠檬酸产生菌的分离及初筛实验目的：1、了解黑曲霉菌在工业生产中的不同作用；2、复习掌握从土壤中分离工业用微生物的原理及方法；3、掌握利用变色圈法筛选产酸菌的方法。实验目的：1、了解黑曲霉菌在工业生产中的不同作用；2、复习掌握从土壤中分离工业用微生物的原理及方法；3、掌握利用变色圈法筛选产酸菌的方法。实验原理：1、新菌株的分离大致可分为采样、增殖（富集）培养，分离鉴定、性能测定等步骤。2、柠檬酸可由曲霉菌发酵糖类而生成，其中尤以黑曲霉产酸能力最强。目前工业生产中多以黑曲霉为柠檬酸产生菌。3、黑曲霉耐酸性较强，在pH值1.6时仍能良

5、好生长。利用其产酸高、耐酸强的生理特征，使用pH1.6的酸性营养滤纸分离该菌，简单易行，再加上用变色圈法进行初筛，使产柠檬酸的菌株更易被选出。4、黑曲霉产生的柠檬酸,可利用Deniges氏液鉴别；其产酸量可用0.1N氢氧化钠滴定。1、土壤采样2、准备稀释分离用的器材3、将平皿、吸管包好后干热灭菌4、配制察氏培养基5、做成固体斜面柠檬酸产生菌的分离实验步骤:6、配成蓝色的察氏-多民培养基7、湿热灭菌8、摆斜面、倒平板9、稀释土样10、涂布均匀11、倒置培养。变色圈反应1、配制初筛发酵培养基并灭菌2、观察菌落3、挑选菌落变色圈，测量变色圈与菌落

6、直径之比，取比值较大者4、将选好的菌株编号，接入斜面。同时采用倒置接种法在培养皿上点植接种5、培养斜面和平皿6、摇瓶发酵7、柠檬酸鉴定8、产酸量的测定。柠檬酸产生菌的初筛实验步骤:1.简述从土壤中筛选产目的产物微生物菌种的过程。2.土壤采样时应注意的哪些问题？3.黑曲霉柠檬酸产生菌菌株的富集应考虑利用哪些特点来进行富集？思考题实验二柠檬酸产生菌的复筛实验目的：1.掌握以初筛的菌株为基础进行选优的复筛方法；2.掌握摇瓶发酵的方法。初筛选出的菌株必须进行摇瓶发酵复筛，复筛不是初筛简单的重复。复筛的主要目的：①考查菌株生产能力的自然波动范围；②复

7、筛的菌种经过斜面传代，在摇瓶复筛中考查菌种的传代稳定性；③选出稳定、高产的菌株。实验原理：1.将各菌种的孢子接种蔗糖培养基中，同时作对照实验2.将实验组和对照组摇瓶振荡发酵培养3.发酵结束后，测定并计算出空白对照和各菌种的平均产酸率4.选取产酸率高且稳定的菌株实验步骤1.为什么在平板初筛中有些菌落透明圈或显色圈很大，但摇瓶发酵试验结果产酸甚低？2.复筛中应该注意那些事项。思考题实验三应用正交实验法优选柠檬酸产生菌的最佳发酵培养基实验目的1.掌握利用正交实验优选最佳发酵培养基的方法；2.掌握极差法分析正交试验结果的方法。正交设计是利用一套规格

8、化的表格—正交表，科学合理地安排试验。这种设计的特点是在试验的全部处理组合中，仅挑选部分有代表性的水平组合进行试验。通过这部分试验了解全面试验情况，找到较优的水平组合。正交表是正