实验室常用溶液配制

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1、实验室常用溶液的配置Amp+/Kan+:贮存液浓度为50mg/mL称取500mg于10mL超纯水中溶解，抽滤后1mL分装到离心管中，于-30℃冻存X-gal：贮存浓度为20mg/mL称取20mgX-gal溶于1mL二甲基甲酰胺中，-30℃中用锡箔纸包裹后避光保存，不需要过滤除菌IPTG：贮存浓度为0.84mol/L称取2gIPTG溶于8mL超纯水中，用水定容到10mL，用0.22um的一次性滤过器过滤除菌，1mL分装到离心管中并于-30℃保存CaCl2：贮存浓度为1mol/L称取1.11gCaCl（或者CaCl:2H2O1.4698g）溶于8mL超纯水中，定容到10mL，用0,22um的

2、一次性滤过器过滤除菌，1mL分装到离心管中，并于-30℃保存LB培养基：胰蛋白胨（Tyrtone）10g/L酵母提取物（YeastExtraction）5g/L氯化钠10/L根据经验用NaOH调节PH为7.2-7.6，然后高压蒸汽灭菌，注意及时从灭菌锅中取出无DNA酶的RNA酶：将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/LTris-Cl（PH7.5）、15mmol/LNaCl中，配成10mg/mL的浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20℃Bradford贮存液95%乙醇100mL88%磷酸200mLG2500.35g室温下可储存，一般4℃Bradford

3、工作液Bradford贮存液30mL双蒸水425mL95%乙醇15mL88%磷酸30mL储存于4℃超声破碎缓冲液KCl300mM22.37gKH2PO450mM6.81gEDTA1mM0.292g(EDTA-2Na-2H2O)0.372g定容至1L，调pH至8.0包涵体洗涤液KCl300mM22.37gKH2PO450mM6.81gEDTA5mM1.46g(EDTA-2Na-2H2O)1.86g尿素2M120gTritonX-1000.5%5ml脱氧胆酸钠盐0.1%1g定容到1L调pH至8.0匀浆缓冲液（pH=7.5）成分：20mMHEPES0.002mol=0.476g加入0.952g

4、1.5mMMgCl20.00015mol=0.0036g加入0.0072g0.2mMEDTA0.00002mol=0.00584g加入0.01168g0.1MNaCl0.01mol=0.58g加入1.16g0.5mM钒酸钠0.00005mol=0.0092g加入0.0184g加100mL水进行溶解，NaOH调pH至7.50.2mMDTT总体积500μL加入0.1μL0.4mMPMSF总体积500μL加入20μL1%SDS加入50μL10%SDS其中DTT和PMSF匀浆之前加入，SDS匀浆之后离心之前加入DTT配成1M母液，溶于0.01M乙酸钠（pH=5.2）中，过滤除菌PMSF配成10m

5、M母液，溶于异丙醇10*PBSNaCl80.0669gKCl2.0129gNa2HPO414.1960gKH2PO42.4496g水定容至1L，使用时稀释10倍，用NaOH调pH至7.4Startwith800mLofdistilledwatertodissolveallsalts.AdjustthepHto7.4withHCl.Adddistilledwatertoatotalvolumeof1liter.Theresultant1xPBSshouldhaveafinalconcentrationof10mMPO43−,137mMNaCl,and2.7mMKClIfusedincell

6、culturing,thesolutioncanbedispensedintoaliquotsandsterilizedbyautoclaving(20min,121°C,liquidcycle).Sterilizationmaynotbenecessarydependingonitsuse.PBScanbestoredatroomtemperatureorinthefridge.However,concentratedstocksolutionsmayprecipitatewhencooledandshouldbekeptatroomtemperatureuntilprecipitat

7、ehascompletelydissolvedbeforeuse.转膜缓冲液（含有SDS）1L剂量甘氨酸2.9gTris5.8gSDS0.37g甲醇200mL水800mL10×蛋白电泳缓冲液1L剂量Tris碱(Mr121.14)30.2g甘氨酸(Mr75.07)188gSDS(Mr288.38)10g加水至1L用时稀释10倍即可30％丙稀酰胺1L剂量丙烯酰胺290gN,N’-亚甲基双丙稀酰胺10g溶于600ml蒸馏水中，加热至37℃