重组细胞因子蛋白溶解详细步骤及注意事项

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1、重组细胞因子蛋白溶解详细步骤及注意事项为了运输方便，稳定活性，一般细胞因子蛋白均为冻干粉，除非一些特殊的重组蛋白。冻干粉可以保证细胞因子在室温条件下很稳定（至少一个月），当然，为了你能得到更加准确的实验结果，确保蛋白百分之百的活性，我们建议你在收到产品后应立即保存于-20℃。对于大多数蛋白质，重悬后在4℃仅能短期保存（约一周）。如果想长期保存，请先配制成稀释液（其中必须含有载体蛋白，如0.1%BSA，5%HSA，或10%FBS），然后分装成合适的量并冻存于-20℃或-80℃。一定要避免反复冻融，因每次冻融均会引起蛋白的部分失活。我们在进行

2、科学研究时，需要将细胞因子按照一定的浓度，以液体的形式加到培养体系或注射入动物体内，因此，在使用前必须将冻干粉进行溶解。在溶解过程中一定要小心仔细，因为溶解不好会导致细胞因子失活或浓度不准确，进而影响实验结果及研究进度。这也是我们在实际使用中经常遇到的问题。那么，怎样的溶解方式才会达到最佳的效果呢？第一步：开盖前一定要离心试剂管。我们的细胞因子蛋白冻干粉是装在无菌的塑料管中的。在运输过程中可能会因颠簸而漂散并粘贴于管壁或管盖上，在收到产品时甚至看不到管中有什么东西，所以在打开塑料瓶盖前，一定要将冻干粉进行离心，保证全部产品都在管底，这样用

3、很小体积的液体就可以将冻干粉完全溶解了。那么，在离心的时候用多少转速、多长时间离心试剂管，才能达到良好的收集效果呢？这个主要看我们实验室离心机配置了。比如我们一般用的台式小型高速离心机，在其面板上一般会有Spin键的。使用此功能，离心机会自动快速的达到最大转速（10000rpm或12000rpm），上升到最高点后速度即刻下降，直至停止旋转，整个过程大约30s。Spin一次就足以将细胞因子蛋白收集到管底。当然，如果实验室没有这样的高速离心机，只有最高转速为4000-4500rpm的离心机，那么只需要将离心机转速设置为3000-3500rpm

4、离心5min，就能达到如上的效果，放心的用于溶解。第二步：用无菌水或合适的Buffer重悬至0.1-1.0mg/ml，不可振荡。从这一步开始，正式进入溶解环节，决定着细胞因子的浓度是否正确，活性是否可以达到100%，所以一定要小心操作。首先，要选择正确的溶液重悬冻干粉，一般选择说明书推荐的。可以用于细胞因子冻干粉溶解的溶液有很多，有的可以直接用无菌水溶解，有的需要不同组分的buffer。如重组人IL-4可以用水溶解，但是重组人IL-2就需要用100mM醋酸溶解，重组IL-13需要20mM的HCl溶解，重组人TGFB1需要pH3.0浓度为1

5、0mM的柠檬酸溶解，重组人FGF-10需要pH7.4浓度为5mM的磷酸钠溶解。对于重组细胞因子冻干粉来说，即使是同一个分子的蛋白，不同批次间的溶解方法也可能会有所不同，因此，我们每一个出库的产品都会随产品包装有一份COA资料，将这个产品溶解的具体要求写清楚。当然，在购买之前，也可以通过联系我们，得到关于这个产品的详细信息。可能大家看到这里，就有所疑问，为什么一个简单的溶解还需要这么多种方法呢？其实这个是由蛋白质的性质决定的。我们知道影响蛋白质溶解性的因素有很多，比较重要的是溶液的pH值和离子强度。在每一个细胞因子重组蛋白在出库之前，都会经

6、过严格完整的QC检验，会对冻干粉的最佳溶解溶液进行测试，将能完全溶解该因子产品的溶液标明。如果您在溶解时所用溶液的pH值和离子强度与说明书中所标明的不符，可能会使细胞因子溶解不完全，甚至完全不溶解，这样就会使这个蛋白的活性不够或丧失。当然也有人会根据习惯直接用PBS或培养液等溶解细胞因子的冻干粉，这样做也不是不可以的，因为有部分细胞因子冻干粉的最适溶解液就是1XPBS。对于这类的细胞因子用PBS溶解是完全没有问题的，也可以用培养基溶解，不过最好还是先用PBS溶解，再用培养基溶液进行稀释。对于那些最佳溶解液不是PBS的细胞因子冻干粉，就千万

7、不能用PBS直接溶解了，这样可能会造成不必要的损失。其次，一定要按照说明书溶解到指定的浓度。重组细胞因子想要保持良好的稳定性是需要一定的浓度范围的，这个范围在说明书上都会标明，如0.1-1.0mg/ml。当然，这个浓度对于不同的细胞因子是会有所不同的。如果高于或低于这个浓度范围，就可能会使细胞因子的活性下降。如果高于这个浓度范围，就有可能会超过该因子的最大溶解度，使其无法完全溶解。还有就是高于或低于这个范围，可能会出现蛋白质聚集现象，同样会使部分蛋白质不溶解，导致蛋白质活性下降。第三，在溶解过程中不可以振荡(vortex)。在固体溶解的时

8、候，为了使其溶解充分，我们一般会用涡旋仪进行快速振荡。但是对于细胞因子重组蛋白来说，只有具有一定的空间结构才可能使其活性最佳。因此，在冻干粉溶解过程中，一定不能用涡旋振荡器进行vortex。那