样本前处理规范(人)

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1、生物样本库指导性文件技术规范与控制程序版本号V1.00样本前处理规范(人)采集好的样本应尽快在采集处或者转移至处理中心进行前期处理。不同类型、不同研究目的的样本前处理的方法不同，处理人员应严格按照标准操作规程进行。1.血液样本血液样本采集完毕，需要尽快对样本进行前期处理。样本处理前的冷藏最好不超过4h，以尽量降低凝血反应的影响。不能在采集地点立刻进行前期处理的样本也应低温冷藏尽快转移至处理中心处理。采集的全血经过分离后成为血清、血浆和血沉棕黄层等血液成份进行样本储存或继续进行提取DNA、蛋白质等样本制备。

2、1.1全血1.1.1采集的血液样本如不进行成分的分离，直接用于全血的储存，也需要稍作前期处理。抗凝的血液应被快速地冷冻上。如果需要完整的血细胞，则需要使用二甲基亚砜(DMSO)以确保在冷冻时细胞是存活的。1.1.2血液按要求分装到统一规格的无菌冻存管中，加入DMSO混合均匀后将冻存管放入冷冻冰箱中。在至少4小时候后，才能转移到-80℃或更低温条件下储存。1.2血浆、血沉棕黄层和红细胞1.2.1用途用EDTA管和ACD管采集的血液，经离心后可以分为三层：上层的血浆，中层的血沉棕黄层，下层的红细胞。血浆可以用

3、于生物鉴定，DNA提取，蛋白质组学分析和生物标志物发现等研究。血沉棕黄层是一层很薄的、灰白色的白细胞和血小板层，可以用于DNA的提取和细胞系的产生。1.2.2处理方法1)4℃下离心真空采血管(大约5ml)，使血浆从血细胞中分离；1生物样本库指导性文件技术规范与控制程序版本号V1.002)用70%的酒精对采血管顶端和管盖进行清理消毒后，取出上层血浆(约3ml)，分至5-6个标记好的冻存管中，每管500ul(每管分装的体积可视具体情况而定)；3)取出中层的血沉棕黄层(约200ul)，平均分至2个标记好的冻存管

4、中；4)将下层红细胞转移至标记好的冻存管中；5)将上述冻存管放入液氮中快速冷冻，对于白细胞层最好使用程序降温法进行冷冻；6)冷冻好的样本储存在-80℃或液氮环境中。1.3血清、血凝块采集到没有抗凝血剂离心管中的血液室温下会在30分钟内自动分成两相，固相含有纤维蛋白和细胞，液相则含有血清。1.3.1室温下离心真空采血管；1.3.2将上清液转移至5个标记好的冻存管中；1.3.3将下层血凝块用无菌光滑玻璃棒轻轻混匀，然后用药匙小心分装至2个标记好的冻存管中；1.3.4将冻存管放入液氮杜瓦瓶或干冰中快速冷冻；1.

5、3.5储存在-80℃或液氮环境中。1.4滤纸血斑要将采集的血液处理成血斑时，需要用到滤纸。使用EDTA/ACD管采集的血液来制造血斑。拿滤纸时一定要戴手套，且只能捏拿滤纸的最上角，标记好。不要让滤纸接触到任何不干净的表面。1.4.1在开始前，反转真空采血管使得里面的抗凝血充分混合；1.4.2打开管盖前，先用70%的酒精擦拭采血管的顶部；1.4.3使用微量移液管吸取一定量的血液，滴到滤纸圈中，制得滤纸血斑；2生物样本库指导性文件技术规范与控制程序版本号V1.001.4.4将滤纸放置在II级生物安全柜内，自动

6、晾干；1.4.5将滤纸放在一个纸质信封(严禁塑料)里，-20℃储存。1.5注意事项1.5.1制备血浆时，应尽快的离心血液。1.5.2制备血清时，血液应该在采集后1小时内处理好。超过了这个时间，细胞活性会迅速下降，导致细胞结构脆弱，蛋白质和核酸降解。1.5.3用于蛋白质组学研究的血液标本，应在室温下尽快的处理好，因为低温会激活血小板，并释放肽段到体外样本中。2.组织样本采集好的组织样本需要尽快进行前期处理，最好在30min内完成。超过了时限的组织，依然应该进行处理，但需记录下这个延迟的信息。组织主要被处理成

7、3类样本进行储存：新鲜冰冻组织样本，OCT包埋冰冻组织样本和石蜡包埋组织样本。2.1新鲜冰冻组织2.1.1对于从非高危险性病人身上取得或被认定为不具有高危险性的组织，优先处理储存为新鲜冰冻组织样本。为获取新鲜冰冻组织样本，不能使用福尔马林处理样本。2.1.2用于快速冷冻的组织标本，切割成大小0.5×0.5×0.5cm左右的小块。较小的组织碎片也应该被快速冷冻，并储存进组织库中。2.1.3样本量足够的情况下，正常组织和癌旁组织各处理成3份，肿瘤组织处理成4份，分别装于标记好的冻存管中。其中一份肿瘤组织用于质

8、量控制，其余低温保存。2.1.4切割成大小合适的组织样本应尽快进行快速冷冻，冷冻的时间不宜过长，一般控制在1分钟，具体时间根据组织块的大小而定。快速冷冻时可以选择直接3生物样本库指导性文件技术规范与控制程序版本号V1.00冷冻，或将组织封装在容器中，再整个放入冷冻剂(例如预冷的异戊烷)中储存。不建议使用液氮作为直接冷冻的冷冻剂，因为其会造成白化等危险的事故。2.1.5快速冷冻时如果不采用直接冷冻，还有如下方法可以选择：1)将组