蔗糖酶活力测定

《蔗糖酶活力测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、一、目的了解植物组织中提取蔗糖酶的方法，掌握蔗糖酶活力测定的原理。二、原理本实验以Nelson方法测定酶活力，其原理是：蔗糖酶可将非还原性的蔗糖水解为葡萄糖和果糖，而葡萄糖作为还原糖含有的自由醛基，在碱性溶液中将Cu2+还原，还原糖本身被氧化成羟酸；砷钼酸试剂与氧化亚铜生成蓝色复合物（砷钼蓝），在510nm波长下有正比于还原糖浓度的光密度，从而确定蔗糖酶的活力，该法测定的范围为25~200μg。三、主要仪器及试剂四、操作步骤1．标准曲线制作（1）取9个具塞试管，按表1加样：（2）向每管中加1mLNelson试剂，盖上塞子，

2、置沸水浴中20min。冷至室温，向每管中加1mL砷钼酸试剂。（3）5min后，向每管中加7mL蒸馏水，混匀。（4）在510nm下测定光密度，以还原糖葡萄糖为横坐标，以OD510nm值为纵坐标，制作标准曲线。2．酶活力测定取2g小麦苗，加入2mL乙酸缓冲液，在冰浴中用研钵研磨成糊状，12000r/min离心10min，留取上清液用于酶活测定。取2支具塞刻度试管，向每个试管中加入乙酸缓冲液0.8ml，0.5mmol/L蔗糖溶液0.2mL，适当稀释的酶液1mL，以同样处理但不加酶液者为空白对照，室温下放置10min。然后向每管中

3、加1mLNelson试剂，置沸水浴中20min。冷却至室温，向每管中加1mL砷钼酸试剂，5min后，向每管中加7mL蒸馏水，510nm下比色，测定光密度OD510nm。五、实验结果活力计算：在室温、pH4.5条件下，每分钟水解产生1μmol葡萄糖所需的酶量，定义为酶的1个活力单位（U）酶活力的影响教师：XXX实验类型：基础学时：10(参考)内容：一、实验目的初步掌握用正交表设计实验方案并用数理统计方法处理实验数据的步骤和注意事项。二、实验原理酶的催化作用受多种因素的影响。欲求某因素对酶活力的影响，通常是固定其它因素，测定该

4、因素不同水平下的酶活力。这是将多因素化为单因素处理的简单比较法。三、试剂与器材分光光度计、恒温水浴、秒表、沸水浴等。DNS试剂、pH4.60.2ml/L的醋酸buffer、0.2mol/L蔗糖液、各种pH缓冲液四、操作方法①讲授正交实验设计法的基础知识及使用注意事项②用正交表进行实验并对实验结果进行极差分析和方差分析③求出蔗糖酶的最适温度和最适pH值五、关键步骤与注意事项①被考察因素以外的实验条件必须保持稳定②方差分析的计算要用电脑编程六、思考题1、设计试验方案时，应遵循的原则是什么？2、正交试验设计法与简单比较法、全面试

5、验法相比较，有何优缺点？提示：本文用正交实验设计法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响属于实验设计文章，主要