毕赤酵母表达系统

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1、毕赤酵母表达系统CasparGu2010-2-25原核表达系统酵母表达系统1234昆虫-杆状病哺乳动物细胞毒表达系统表达系统目录简述步骤Tel:0510-86419770Fax:0510-86419769Web:www.chiscientific.cn简述发展历史•KoichiOgata等人于1969年首次发现了某些酵母可以利用甲醇为唯一碳源和能源生长(Ogata,eta1.1969)；•此后，七十年代应用于单细胞蛋白饲料的表达；•1987年，Cregg等人首次用甲醇营养型酵母表达乙型肝炎表面抗原。优点•表达效率高，既可胞内表达，又可分泌表达；•培养简单廉价；•翻译后修饰；•具有强启动子

2、AOX1；•外源基因稳定，随基因组复制；•能以甲醇作唯一碳源。缺点•表达周期长；•甲醇一定的危险性；•有时会出现蛋白切割功能。Tel:0510-86419770Fax:0510-86419769Web:www.chiscientific.cn步骤1分子克隆2感受态制备3转化和筛选4扩大培养5蛋白纯化Tel:0510-86419770Fax:0510-86419769Web:www.chiscientific.cn1分子克隆设计引物组DNAPCR常用载体：pPIC9K，pPICZα，pGAPCZα。电击转化Tel:0510-86419770Fax:0510-86419769Web:www.

3、chiscientific.cn2感受态制备YPDYPDYPDOD值1.3~1.5!水水山梨醇山梨醇重悬Tel:0510-86419770Fax:0510-86419769Web:www.chiscientific.cn3转化和筛选分子克隆GS115pPIC9K-GDH电转化MHis+DMMMMut+D1g2g4gG418多拷贝/L/L/L最佳时间扩大培养下游纯化BMGYBMMYTel:0510-86419770Fax:0510-86419769Web:www.chiscientific.cn4扩大培养甲醇浓度培养时间获取上清Tel:0510-86419770Fax:0510-86419

4、769Web:www.chiscientific.cn5蛋白纯化硫酸铵过夜离心，去上清溶解亲和层析超滤除咪唑、盐交付冻干Tel:0510-86419770Fax:0510-86419769Web:www.chiscientific.cn