血液标本收集和保存..

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1、血液标本的收集和保存方法说明：一般建议用新鲜的血液标本进行实验。如果标本已经保存较长时间，请联系康成公司技术部，以确认样本是否适合进行实验。一、全血收集请按照实际使用的收集方法，如注射器收集或真空收集管等，参考相应的厂商提供产品说明进行操作。采集好全血，将采集好的全血转移至单独的冻存管，按照每400~500ul/管分装好。短期保存，可放入-20°C或-70°C冰箱。长期保存，请放入液氮。二、血浆收集为获得血浆进行实验，应使用抗凝管采集全血，并尽快进行血浆分离：1000g离心10分钟，分离血浆和细胞组分。将采集好的血浆转移至单独的冻存管，按照每400~500ul/管分装好。短期保存，可放

2、入-20°C或-70°C冰箱。长期保存，请放入液氮。图片来源：Exiqon‘QuantificationofMicroRNAexpressioninBloodPlasma/SerumSamples’注意：血浆收集应使用抗凝管，抗凝剂可以用柠檬酸钠或EDTA等，但一定不要使用肝素抗凝，因为肝素对RNA实验有较大影响三、血清收集为获得血清进行实验，应使用凝血管采集全血，采血后两小时内分离血清。采血后轻轻倒转采血管混合4~5次，直立置于室温待血液完全凝固（一般约一小时），1000g离心10分钟，分离血清。将采集好的血清转移至单独的冻存管，按照每400~500ul/管分装好。短期保存，可放入-

3、20°C或-70°C冰箱。长期保存，请放入液氮。四、血清、血浆和全血样本的保存和运输→microRNA芯片检测血清、血浆或全血标本约需要1~2ml的量（即每份样品2~4管）。→在样品保存及转移的过程中，应避免反复冻融样品。→运输过程必须使用足量干冰保证始终低温。干冰量至少为8公斤（足量），且运输用厚壁泡沫箱，且需用封箱带密封。注：保存血清，血浆或者全血所使用的1.5ml冻存管或离心管，操作中使用的枪头等必须高温灭菌，装好样品后管口需要以封口膜封好。参考文献：1.SignaturemicroRNAExpressionProfileofEssentialHypertensionandIts

4、NovelLinktoHumanCytomegalovirusInfection.LiS.,etal.,Circulation,2011.2.CharacterizationofmicroRNAsinserum:anovelclassofbiomarkersfordiagnosisofcancerandotherdiseases.XiC.,etal.,CellResearch,2008.附：TRI抽提RNAprotocol→如果条件允许，亦可采用TRIReagentBD保存全血、血浆和血清，并抽提其中的RNA→TRIReagentBD（Forprocessingwholeblood,p

5、lasma,orserum）可以从Sigma或者MRC(MolecularResearchCenter)订购1、RNA的抽提采用TRIReagentBD从全血、血浆和血清中抽提RNA，整个过程可以在1小时内完成，完整的RNA的得率比其他的抽提方法高30－150％。其他方法抽提的RNA的完整性都不如TRIReagentBD，特别是采用柱离心式抽提方法很可能改变RNA的组成。TRIReagentBD尤其适用于抽提病＋毒RNA。抽提得到的RNA可用于northern、dotblotbybridization、polyAselection、invitrotranslation、RNasepro

6、tectionassay、molecularcloning和PCR。实验方法需要自备的试剂：1‐bromo‐3‐chloropropane（溴氯丙烷，BCP）或氯仿、异丙醇、乙醇和5N醋酸建议使用一次性的聚丙烯离心管，并可承受12,000g离心。1、裂解：0.75mlTRIReagentBD＋0.2‐0.25ml全血、血浆或血清2、两相分离：裂解液＋0.1ml溴氯丙烷或0.2ml氯仿3、RNA沉淀：水相层＋0.5ml异丙醇4、洗RNA：1ml75％乙醇5、RNA溶解：FORMAzol、0.5%SDS、或水实验在室温中进行，除非特定步骤。1、裂解A、血清：加入0.25ml血清和2‐8ul

7、PolyacrylCarrier（Cat.No.PC152）到0.75mlTRIReagentBD中，盖上盖子，用手或震荡器晃动离心管直至充分混匀。B、全血或血浆：加入0.2ml全血或血浆到0.75mlTRIReagentBD，每0.2ml全血或血浆添加20ul5N醋酸，盖上盖子，用手或震荡器晃动离心管直至充分混匀。醋酸可以在混合血液样品前的TRIReagentBD中添加，也可混合后添加。用1ml冰醋酸（>99％）与2.48ml水混合制备5N的