神经肌肉性疾病患者线粒体dna突变的分析 analysis on the mitochondrial dna of patients with ne

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1、遗传HEREDITAS(Beijing)21(2):1.61999遗1P专快报·番茄1-氨基环丙烷梭酸（ACC）合成酶基因的反义RNA-核酶嵌合DNA序列的构建①仇润祥②危廷茂③王永胜张晓海刘中大（内蒙古大学生物系呼和浩特010021)摘要根据番茄ACC合成酶基因（LE-ACC2)DNA序列，以番茄（勿copersiconesculentumMill）果实的总DNA为模板，利用PCR技术扩增得到预期大小的该基因编码区内部分DNA序列，插人到质粒载体pGEM-3zf(+）的BamHI和HindIII位点之间后转化

2、E.coliDH-5a，可选出重组子pRE,经酶切，PCR及DNA序列分析证明克隆成功；将pRE上的目的DNA序列以反义方式构建到我室已合成并克隆的含核酶DNA序列的重组质粒pRI的BamH工和Hind班之间，构成含有反义RNA一核酶嵌合DNA序列的重组质粒pREI，经酶切及序列分析，结果与预期一致·关键词番茄，ACC合成酶，反义RNA一核酶嵌合基因中图分类号Q78,Q943TheConstructionofAntisenseRNA-RibozymeChimericDNASequenceofTomatoACCS

3、ynthaseGeneQIURun-XiangHUTing-MaoWNAGYong-ShengZHANGXiao-HaiLIUZhong-Da(DepartmentofBiology,InnerMongoliaUniversity,Huhhot010021)AbstractAccordingDNAsequenceofTomatoACCsynthasegene(LE-ACC2),andusingtotalDNAoffruitoftomato（匀。copersiconesculentumMill)astemplat

4、e,theexpectedpartialDNASequenceincodingregionofgenewasobtaintedbyPCRamplificationandinsertedimtopGEM-3zf(+)digestedwithBamH工andHindUl．thenwetransformedthesystemintoDH5-aandselectedthepostiverecombinant(pRE)."Ihedigestionofenzyme,PCRamplificationandsequenceof

5、DNAanalysisdemonstratedthatthecloningwassuccessifui;Bytheantisenseway,theDNAsequencefrompREwascombinedtopRIbetweenBamHIandHindUltoconsturctpREIcontainingantisenseRNA-RibozymechimericDNAsequence(pRIwasconstructedinourLabandcontainsRibozymeDNAsequence),Therest

6、rictionmapofrecombinantsandsequenceanalysiswereindenticaltotheexpectedresults.KeywordsTomato,ACCsynthase,AntisenseRNA-ribozymechimericDNA番茄是一种重要的经济作物，同时又是植物基因工程的模式植物〔‘〕。过去几年对其果实的成熟机制及应用1;国家自然科学基金（39460032)和内蒙基金资助项目含仇润祥，男，26岁，硕士研究生，专业方向为分子遗传学31通讯联系人。2遗传HEREDI

7、TAS(Beijing)199921卷反义基因延熟方面的研究比较深人．乙烯是植物内源性成熟激素，具有明显的果实催熟作用。1979年，Adams和杨祥发阐明了乙烯的生物合成途径〔2)。乙烯的直接前体ACC的合成是由ACC合成酶这个限速酶来催化的1991年，Rottman等〔’〕从成熟的番茄果实里克隆了5个ACC合成酶基因，其中LE-ACC2与Straeten1989年报道的pCVV4A完全一样，与番茄的成熟直接相关。因此，基于ACC合成酶在乙烯生物合成方面的重要性，在基因水平上控制ACC合成酶的表达成为植物果实延

8、熟及抗衰老的一个研究热点。1991年，Oelle：将ACC合成酶的反义基因导人番茄植株中去〔4)，在所培育成功的转基因番茄果实中，乙烯的合成被抑制了99.5。国内外应用反义技术在抗病毒感染和果实保鲜等方面开展了不少工作，但效果不等。甚至有将番茄ACC合成酶基因及其反义基因导入其它植物（如西瓜）也取得了一定的效果〔”。目前应用基因工程进行果实保鲜和延熟几乎都集中于反义技术，但其在体内作用