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1、PRRS灭活疫苗的研制进展猪繁殖与呼吸综合征（Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS）又称“蓝耳病”，该病从20世纪80年代出现以来，已给全球的养猪业造成了严重的经济损失。PRRS灭活疫苗是当时首个能冇效应对该病的生物制品，它安全、贮存方便、研制周期短，主耍用于预防后备母猪和经产母猪感染PRRS病毒。合适的毒株、培养条件、灭活工艺与佐剂是该疫苗研发的关键。木文将讨论PRRS灭活疫苗研制的最新进展。一、毒株的选择毒株的选择对于PRRS灭活疫苗的研制至关重要。目询PRRS毒株主要存在欧洲和美洲两人
2、类型，两者相似性只有60%；即使是同一个类型，不同PRRS毒株的同源性也不高，最低的只有85%,这是因为PRRS病毒的变界速度相对较快，Hanada等学者［1］分析了过去十多年PRRS病毒的全基因序列，提出PRRS病毒的进化率（103位/年）要明显高于他RNA病毒（KT"/位/年）。因此，prrs灭活疫苗毒株必须要有代表性，应符合疫苗使用地区流行毒株的特点。口前商业上已经成功开发了多个针对美洲型PRRS毒株（CH・la、ISU・P、JXA1、VD-A1）与欧洲型PRRS毒株（LV、VD-EKVD-E2）的灭活疫苗。它们对疫苗来源相同的强毒株都能提
3、供很好的免疫保护［2-7］o此外，还有-•些灭活疫苗正处于研发阶段,包括欧洲型的PRRS-CY-218-JPD-P5-6-91OrOlotW株［8］,以及美洲型的SD・1毒株［9］等。PRRS灭活疫苗的保护力一直备受质疑，这可能与学者们在攻毒吋所使用强毒株的不同有关。Swenson等学者（1995）证实，PRRS灭活疫苗可以缩短攻毒后公猪精液中病毒的持续吋间［11］;两年后Nielsen学者再次用来源相同的灭活疫苗（PRRomiSe®,英特威，疫苗株VR・2402）免疫公猪，但没能减少精液屮的病毒含量［10］o两个试验不同之处在于前者使用的攻毒株
4、与疫苗株相同（即VR-2402）,后者使用的攻毒株是VR-2385,这说明灭活疫苗的交叉保护力较弱。也有学者对此表示异议，Stadejek等学者发现，欧洲型PRRS毒株的灭活疫苗对欧洲型LVPRRS强毒株的免疫失败，但欧洲型PRRS毒株的弱毒疫苗则可以提供较好的保护作用［12］。灭活疫苗的GP5蛋白与LV毒株的同源性为99%,而弱毒疫苗的相关同源性只有93%,以上结果是建立在屮和抗体有效的基础之上。此外，Osorio（1998年）和Scortti（2006年）｛Scortti,2006#109｝等两位学者的试验表明，弱毒疫苗对于同型的不同亚群的P
5、RRS强毒，其交义保护力分别为50%和85%,然而这又如何解释对于不同类型的PRRS强毒，弱毒疫苗的交叉保护性低的现彖？因此，灭活疫苗的保护效力肯定与毒株的同源性密切相关，但PRRS弱毒疫苗的交叉保护性要更优于灭活疫苗。灭活疫苗的交叉保护性较差，以下三种途径或许可以捉供帮助：一是使用自家苗，国内很多猪场使用该方法。国外MJBiologies公司也研制出了一种PRRS亚单位灭活疫苗技术［13］,主要应用于自家苗的生产。目前国内有技术力量的猪场自己生产自家苗，没有技术力量委托市场上的游击队，但这都与严格的GMP生产相矛盾：病料灭活的不彻底、产品和病料
6、的交叉污染、安全检验的不规范，使猪场时刻在“刀刃”上游走，随时都有可能暴发大规模疫病；二是开发PRRS灭活多价苗，勃林格殷格翰公司2004年在屮国中请的弱毒疫苗专利包括了两个疫苗株（疫苗株ATCC保藏号分别为PTA-6281和6282）［14］；2005年韩国公司中请的中国专利，其PRRS二价灭活疫苗的生产种毒也包含了两个疫苗株，即VR-2509（MN-HS毒株）与CNV-1［3］；欧洲捷克Dyntec公司生产的PRRS灭活疫苗，SUIVACPRRS-IN®和SUIVACPRRS・INe®,则分别含有3与2种PRRS疫苗株，其屮SUIVACPRR
7、S4N®疫苗含有一株美洲型疫苗株。三是选择合适的制作工艺，这对于保护毒株的免疫原性罪常重要。包括灭活前病毒含量、灭活工艺、佐剂和乳化工艺，详见下文。二、病毒培养PRRS灭活疫苗的病毒培养必须注意以下两点：一是必须达到一定标准的病毒含量；二是与分离株尽量保持相同的同源性和免疫原性。增加传代次数可以提高病毒的TCID50,但综合考虑研发时间和成本，以及保持疫苗株的同源性和免疫原性，PRRS灭活疫苗的培育代次普遍不高。合适的培养细胞也能提高病毒的TCID50,Marc-145细胞［5,9,15-21］和MA-104细胞［22］是目前PRRS灭活疫苗生产
8、的主要细胞系，此外的生产细胞系还有猪肺泡巨噬细猪睾丸细胞或A・72细胞［3］。Thomas等学者述对MA-104细胞系进行克隆，得到90
