犬莱姆病诊断方法的建立及应用

《犬莱姆病诊断方法的建立及应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：Ｓ８５２．６５单位代码：１０１８３２０研究生学号：１６８５４０２５密级：公开吉林大学硕士学位论文专业学位（）犬莱姆病诊断方法的建立及应用ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＤｉａｇｎｏｓｉｓＭｅｔｈｏｄｆｏｒＣａｎｉｎｅＬｍｅＤｉｓｅａｓｅｙ作者姓名：杨莹莹类别：兽医硕士专业名称：兽医指导教师：丁壮教授培养单位：动物医学学院２０１８年６月犬莱姆病诊断方法的建立及应用EstablishmentandApplicationofDiagnosisMethodforCanin

2、eLymeDisease作者姓名：杨莹莹专业名称：兽医指导教师：丁壮教授类别：兽医硕士答辩日期：201865年月日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学硕士学位论文原创性声明？本人郑重声明．所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写

3、过的作品成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：曰期《年匕月＾曰宠物细菌与真菌传染病诊疗与防控新技术研究国家重点研发计划（项目编号：2016YFD0501005）摘要犬莱姆病诊断方法的建立及应用莱姆病（Lymedisease）是由媒介蜱传播的伯氏疏螺旋体（Borreliaburgdorferisensulato）感染所引起的一种自然疫源性疾病，是由虫媒介蜱传播的人兽共患病，该病发生和流行的时间与蜱虫活跃时间一致。莱姆病对人类、动物的健康构成了严重的危害，主要波

4、及野生动物及宠物的健康养殖，已成为全球严峻的公共卫生问题。1986年，自艾承绪等首次在黑龙江省海林县发现本病以来，我国目前已有30个省（市、区）经确认为莱姆病自然疫源地，主要分布在华北、西北和东北林区，分布呈现地域聚集的趋势，该病的发生依赖于其媒介蜱以及宿主动物的分布，但由于蜱虫叮咬时无痛感，且该病的早期症状不明显，常与风湿性关节炎等疾病、发烧等现象混淆导致错过最佳治疗时间。早在1993年，于美国纽约25个城镇采集的1446份犬血液样本中，犬莱姆病阳性率介于6.5％至85.2％之间。该数据表明由于人类与宠物犬关系密切，导致人感染莱姆病的机率增加。随着我国经济快速发展与

5、人民生活水平的提高，宠物逐渐成为了人们生活中不可或缺的一部分。然而，我国对于犬莱姆病的血清学检测方法尚未报道，因此建立快速准确的犬莱姆病诊断方法迫在眉睫。本研究在国家十三五重点研发项目“宠物细菌与真菌传染病诊疗与防控新技术研究”（项目编号：2016YFD0501005）支持下，建立伯氏疏螺旋体SYBRGreenI荧光定量PCR方法和犬莱姆病间接ELISA诊断方法，为宠物与人类的健康安全提供技术支持与保障。主要研究内容如下：I.伯氏疏螺旋体SYBRGreenI荧光定量PCR检测方法的建立本研究基于国内外主要流行的伯氏疏螺旋体菌株的3个基因型：嘎氏疏螺旋体（B.garin

6、ii）、阿氏疏螺旋体（B.afzelii）、狭义伯氏疏螺旋体（B.burgdorferisensustricto）中的16SrRNA基因片段为模板，针对伯氏疏螺旋体的保守区域设计Real-timePCR特异性引物，建立荧光定量方法。其中该方法标准曲线的相对系数R2为0.99，扩增效率为98.217%。特异性试验结果表明，所建立的方法只特异的检测出伯氏疏螺旋体，而与其它病原无交叉反应。敏感性试验结果表明此方I法比普通PCR灵敏104倍，能够检测到的最小拷贝数为4.72copies/μL。应用该方法对采自吉林省四平市的25只蜱虫样本进行检测，样品阳性率为40.00%。II

7、.伯氏疏螺旋体OspC的克隆表达及抗原性分析选取伯氏疏螺旋体外膜蛋白C（OspC），经过生物信息学分析，利用原核表达载体对B31菌株的OspC基因进行表达、纯化和Western-blot分析，表明该蛋白具有良好的免疫原性。III.犬莱姆病间接ELISA诊断方法的建立与应用本研究建立了一种用于犬莱姆病诊断和血清流行病学调查的ELISA方法。以OspC蛋白为包被抗原，建立了用于犬莱姆病抗体检测的间接ELISA方法。应用该方法对所采集到的309份犬血清临床样品进行应用检测，平均抗体阳性率达20.71%。结果表明本研究所建立的ELISA方法可用于临床血清样本