沙门氏菌检测

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1、沙门氏菌检测1设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1.1冰箱：2℃～5℃。1.2恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃。1.3均质器。1.4振荡器。1.5电子天平：感量0.1g。1.6无菌锥形瓶:容量500ml，250ml。1.7无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头。1.8无菌培养皿：直径90mm。1.9无菌试管：3mm×50mm、10mm×75mm。1.10无菌毛细管。1.11pH计或pH比色管或精密pH试纸。1.12全自动微生物生化鉴定系统。2培养基和试剂2.1缓冲蛋白胨水（

2、BPW）：见附录中1。2.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：见附录中2。2.3亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见附录中3。2.4亚硫酸铋（BS）琼脂：见附录中4。2.5HE琼脂：见附录中5。2.6木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂：见附录中6。2.7沙门氏菌属显色培养基。2.8三糖铁（TSI）琼脂：见附录中7。2.9蛋白胨水、靛基质试剂：见附录中8。2.10尿素琼脂（pH7.2）：见附录中9。2.11氰化钾（KCN）培养基：见附录中10。2.12赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录中11。2.13糖发酵管：见附录中12。2.14邻硝基酚β-D半乳糖苷（ONPG）培养基

3、：见附录中13。2.15半固体琼脂：见附录中14。2.16丙二酸钠培养基：见附录中15。2.17沙门氏菌O和H诊断血清。2.18生化鉴定试剂盒。3操作方法3.1试验前准备3.1.1将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、量筒、吸管（1ml、10ml）、稀释剂等移至操作室内。准备好足够用量，避免操作中出入操作间。3.1.2开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置30min。3.1.3操作人员用肥皂洗手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋，用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴好无菌衣、帽、口罩、手套等。 3.1.4操作前先用乙醇棉球擦手、工作台面

4、，再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌剪刀或镊子将供试品启封。 3.2前增菌称取25g（ml）样品放入盛有225mlBPW的无菌均质杯中，以8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或置于盛有225mlBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1mol/ml无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500ml锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36℃±1℃培养8h～18h。如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min

5、,或2℃～5℃不超过18h解冻。3.3增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1ml，转种于10mlTTB内，于42℃±1℃培养18h～24h。同时，另取1ml，转种于10mlSC内，于36℃±1℃培养18h～24h。3.4分离分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于36℃±1℃分别培养18h～24h（XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板）或40h～48h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落。各个平板上的菌落特征见表1。表1沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌

6、落特征选择性琼脂平板沙门氏菌BS琼脂菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。HE琼脂蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。XLD琼脂菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。沙门氏菌属显色培养基按照显色培养基的说明进行判定。3.5生化试验3.5.1自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种

7、赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36℃±1℃培养18h～24h，必要时可延长至48h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2。表2沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果三糖铁琼脂赖氨酸脱羧酶试验培养基初步判断斜面底层产气硫化氢KA＋(－)＋(－)＋可疑沙门氏菌属KA＋(－)＋(－)－可疑沙门氏菌属AA＋(－)＋(－)＋可疑沙门氏菌属AA＋/－＋/－－非沙门氏菌KK＋/－＋/－＋/－非沙门氏菌注：K：产碱，A：产酸，＋：阳性，－：阴性；＋(－)多数阳性，少数阴性；＋/－：阳性或阴性。3.5.2接种三糖铁琼

8、脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水