链霉菌702产孢子固体培养基和培养条件的筛选

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1、Journalof生物数学学报2008，2a(3)：563—568Bi。Inathematics链霉菌702产孢子固体培养基和培养条件的筛选熊智强，。徐平z武琳。张嗣良涂国全。(1华东理工大学生物反应器国家重点实验室，国家生化工程技术研究中心(上海)，上海200237；2江西农业大学生物科学与工程学院，江西南昌330045)摘要：通过单因素实验、均匀设计和正交实验对链霉菌702产抱子培养基和培养条件进行筛选，筛选到的最佳培养基组成为：马铃薯20o9／L，葡萄糖259／L．最佳培养条件为培养温度37。C、培养时间5天和培养

2、基初始pH值8．实验结果表明，采用优化后的培养基和培养条件，使链霉菌702产抱子数达到4．07亿，比原来培养基(高氏一号培养基)产抱予量提高了8．7倍，培养时间却从原来的7天缩短到现在的5天．关键词：链霉菌702；孢子；培养；均匀设计中图分类号tQ939MR分类号：92C99；62P10文献标识码：A文章编号：1001—9626(2008)03—0563-060引言江西农业大学生物工程系应用微生物研究室从土壤中分离筛选到一株链霉菌，简称链霉菌702，其所产生物活性物质对棉花枯萎病菌有较强的抑菌活性，进一步测定它的抗菌谱，

3、发现其所产生物活性物质抑制革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌，同时还能抑制霉菌和酵母菌【11．稳定性的研究测定表明其对热和紫外线稳定，在pH3一pill2条件下稳定，从该菌的发酵产物分离提取和纯化其抗细菌活性物质，经紫外、质谱和核磁共振谱和x衍射测定结果表明，该活性物质为红谷霉素【2】_抗真菌活性组分单体化合物也已获得，完成其紫外、红外、质谱测定，分子量为886，属大环内酯化合物，分子结构待其核磁共振和x衍射结果才能确定．链霉菌702所产生物活性物质在草莓、熟肉制品等食品防腐上也取得了很好的效果【引，这些初步研究显示了其有可

4、能开发为防腐剂、抗菌剂和生物农药的广阔前景．孢子培养基是供菌种繁殖孢子的一种常用固体培养基，对这种培养基的要求是能使菌体迅速生长，产生较多优质的孢子，并要求这种培养基不易引起菌种发生变异，所以对孢子培养基的基本要求：1)营养不要太丰富；2)所用无机盐的浓度要适量；3)要注意培养基的pH值和湿度【4J．对于链霉菌702孢子培养，只是采用一般放线菌能生长的高氏一号培养基作为平板收稿日期：2006—10—12基金项目：国家教育部重点项目(2003—03072)和江西省自然科学基金(0530010)作者简介：熊智强(1981一)

5、，男，汉族，江西永丰人，博士研究生．通讯作者．E-maihtuguoquan@263．net生物数学学报第23卷孢子培养基配方，研究中观察到该菌在高氏一号培养基生长慢，一般需培养7天以上，甚至长达14天，而且产孢子量少，不适合工业生产的要求．因此本文探索适合链霉菌702产孢子多、培养时间短的较优培养基配方和培养条件，以适宜该菌工业发酵生产的要求．1材料与方法1．1材料f1)供试菌株链霉菌702(Streptomyces702)D42．34：由江西农业大学生物工程系应用微生物实验室分离筛选获得，甘油冻存管保存．(2)培养基

6、1)供试菌斜面培养基：高氏一号培养基【5】．2)供试筛选链霉菌702产孢子培养基：(I)高氏一号培养基(II)PDA培养基!。】(III)黄豆饼粉浸出液培养基f。J(IV)淀粉琼脂培养基I6](V)2％麸皮浸出液培养基[。】(VI)3．2％麸皮浸出液培养基[6】．r1．2方法．(1)链霉菌702孢子的培养采用15×150mm的试管中装有4mL的1．1．2所述五种产孢子固体种子培养基；121。C灭菌30min后摆成斜面，每支斜面接同一处理的含有108个／mL孢子数的链霉菌702的孢子悬液0．1毫升．接种后30。C恒温培养，

7、7天后统一记数．(2)链霉菌702孢子记数：光电比浊法【71取已培养7天的链霉菌702孢子试管斜面以30mL带玻璃珠的无菌水洗下，充分振荡后用脱脂棉过滤成单孢子菌悬液，采用两倍稀释法稀释菌悬液，用722s分光光度计在660nm处测不同稀释度的菌悬液的透光率，同时将不同稀释度的菌悬液平板涂布，四天后记数，以透光率为纵坐标，以孢子数为横坐标，得到链霉菌702孢子记数的标准曲线和线性回归方程．不同链霉菌702产孢子培养基的试管斜面，按照上述方法制备菌悬液并测出透光率，再根据相应标准曲线和菌悬液的稀释倍数，求得不同产孢子培养基的

8、链霉菌702的孢子数．(3)实验结果统计分析~s-llJ采用SASVersion6．12软件对实验数据进行拟合、方差分析和均数间的多重比较，采用MATLAB6．5软件进行偏导求模型极值．2结果与分析2．1链霉菌702产孢子培养基的筛选链霉菌702接种在六种供试筛选产孢子培养基上，30。C下培养7天后记数，每组实验四个