实验六-综合实验(四)细菌生理生化试验

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1、实验六-综合实验（10个同学为一组）（四）细菌生理生化试验培养基配制《微生物学实验》P243固体淀粉培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基试剂和溶液配制《微生物学实验》P251卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、40%KOH、5%α-萘酚溶液（一）淀粉水解实验目的掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法（一）淀粉水解实验实验材料与用具大肠杆菌、未知菌固体淀粉培养基、卢戈氏碘液接种环等（一）淀粉水解实验内容与步骤1、每组2个固体淀粉培养基平板2、1个平板分成四等分，穿刺接种2个未知菌，同时穿刺接种大肠杆菌作为阳性对照，还

2、有阴性对照（注意在平板的反面相应地方写上菌名或编号）3、将平板倒置在培养箱中37°C培养24小时4、观察菌生长情况，打开盖子，滴入卢戈氏碘液，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板5、如菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉被水解，为阳性。透明圈大小可初步该菌水解淀粉的能力实验结果（一）淀粉水解实验菌名淀粉水解试验大肠杆菌未知菌（二）糖发酵试验目的了解糖发酵的原理和在细菌鉴定中的作用掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法（二）糖发酵试验实验材料与用具大肠杆菌、未知菌葡萄糖发酵培养基和蔗糖发酵培养基（是液体试管装培养基，内装有倒置的德汉氏小管）试管架、接种环等

3、（二）糖发酵试验内容与步骤1、每个组葡萄糖发酵培养基和蔗糖发酵培养基（是液体试管装培养基，内装有倒置的德汉氏小管）各3只，1只为阳性对照，另2只做平行试验2、在试管外壁标明培养基名称和接种的菌名3、6只试管均放置培养箱37°C培养48小时4、观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡5、变黄说明产酸，小管内有气泡说明产气（二）糖发酵试验实验结果糖发酵大肠杆菌未知菌葡萄糖发酵蔗糖发酵（三）IMViC实验目的了解IMViC实验的原理及其在细菌鉴定中的意义和方法（三）IMViC实验材料与用具大肠杆菌、未知菌吲哚试验-用蛋白胨水培养基（液体试管装培养基）甲

4、基红试验-用葡萄糖蛋白胨水培养基（液体试管装培养基）伏-普（V-P）试验-也用葡萄糖蛋白胨水培养基（液体试管装培养基）接种环等1、吲哚试验1、每组3支蛋白胨水培养基（液体试管装培养基），1支接种大肠杆菌做阳性对照，另2支接种未知菌2、37°C培养48小时3、取出，向培养基内加3-4滴乙醚，摇动数次，静置1分钟，待乙醚上升后，沿管壁徐徐加入2滴吲哚试剂（对二甲基氨基苯甲醛），观察4、在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性2、甲基红实验1、每组3支葡萄糖蛋白胨水培养基（液体试管装培养基），1支接种大肠杆菌做阳性对照，另2支接种未知菌2、37°C培养4

5、8小时3、取出，向培养基内加入2滴甲基红试剂，培养基变为红色者为阳性，变为黄色者为阴性3、V-P试验1、每组3支葡萄糖蛋白胨水培养基（液体试管装培养基），1支接种大肠杆菌做阳性对照，另2支接种未知菌2、37°C培养48小时3、取出，向培养物内加5-10滴40%KOH,然后加入等量（即5-10滴）的5%α-萘酚溶液，用力振荡，再放入37°C保温15-30分钟，以加快反应速度，若培养物呈红色，为阳性。（三）IMViC实验实验结果菌名吲哚试验甲基红试验V-P试验大肠杆菌未知菌环境微生物（细菌）分离鉴定过程取样稀释涂布接种计数、菌落特征观察及挑取优势菌一

6、般形态鉴定（革兰氏染色、芽孢染色）生理生化鉴定（淀粉水解试验、糖发酵试验、IMVIC试验）细菌稀释示意图人员安排1、每个班分成6个组，每组12人左右2、每个组配一种培养基第1组3个同学配牛肉膏蛋白胨培养基800ml，倒36个平板（每组6个）第2组3个同学配固体淀粉培养基300ml，倒12个平板（每组2个）第3组3个同学配葡萄糖发酵培养基200ml，装18支试管（每组3支）第4组3个同学配蔗糖发酵培养基200ml，装18支试管（每组3支）第5组3个同学配蛋白胨水培养基200ml，装18支试管（每组3支）第6组3个同学配葡萄糖蛋白胨水培养基400ml

7、，装36支试管（每组6支）人员安排3、每组配一种试剂第1组2个同学配甲基红试剂第2组2个同学配配卢戈氏碘液第3组2个同学配1.6%溴甲酚紫乙醇溶液第4组2个同学配40%氢氧化钾第5组2个同学配吲哚试剂，准备乙醚第6组2个同学配5%α-萘酚溶液人员安排4、实验过程1）每组选1个组长，跟我去龙湖取样，注意无菌操作。先准备灭菌镊子、10ml带盖离心管、蒸馏水、5支试管、移液管等。2）拿回实验室做梯度稀释至10-5。取试管编号10-1、10-2、10-3、10-4、10-5每管取9ml灭菌蒸馏水取1ml水样入10-1管，吹打几下混匀取1ml水样入10-1

8、管，吹打几下混匀，以此类推，稀释至10-53）3个同学做10-3、10-4、10-5三个稀释度，每个稀释度做2个平板平行。每个平板取10