基于表观遗传研究蜘蛛香有效部位抗缺氧的神经保护作用

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1、成都中医药大学硕士学位论文ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine（基础医学院）二0一七届硕士研究生学位论文基于表观遗传研究蜘蛛香有效部位抗缺氧的神经保护作用StudyontheneuroprotectiveeffectofeffectivecomponentsofValerianajatamansiJonesonhypoxiatolerancebasedonepigeneticstudy所属学科：病原生物学学生姓名：唐玉琴指导教师：张天娥教授二○一七年三月1万方数据成都中医药大学硕士学位论文学位论文基于表观遗传研究蜘蛛香有效成分抗缺氧的神经保

2、护作用StudyontheneuroprotectiveeffectofeffectivecomponentsofValerianajatamansiJonesonhypoxiatolerancebasedonepigeneticstudy唐玉琴指导教师姓名：张天娥（教授）申请学位级别：硕士学位专业名称：病原生物学论文提交时间：2017年3月论文答辩时间：2017年5月二〇一七年三月1万方数据成都中医药大学硕士学位论文摘要目的：构建缺氧实验动物模型，并以此模型验证蜘蛛香有效部位对抗缺氧的疗效，同时动态观察实验动物行为学和组织形态学改变，并考察其表观遗传改变，以期探索表观遗传与缺氧及蜘蛛香有效部

3、位疗效相关性。方法：1.缺氧动物模型的构建20只SD雌性发情期大鼠，按照2：1的比例随机与4月龄性成熟SD雄鼠同笼交配，24小时后，分别对每只雌性大鼠进行阴道涂片检测，确定已经交配成功，将孕鼠随机分成4组：空白组、模型组、蜘蛛香治疗组、红景天组；当日计为孕1天，此后进行缺氧处理，即将蜘蛛香组、红景天组、模型组孕鼠每日定时放入三气孵箱6小时，设置孵箱氧气浓度在8%，二氧化碳浓度4%，其余为氮气，期间不间断观察大鼠生命体征；空白组放置于同样湿度和温度的环境中，期间不间断观察大鼠生命体征；造模持续7天，造模期间，每日观察大鼠精神状态、体重、食量、大便性状、睡眠情况等一般情况。2.蜘蛛香治疗缺氧的行为

4、学观察与组织病理学评价20只SD大鼠随机分为4组，空白组、模型组、红景天组及蜘蛛香治疗组。除空白组外各组按上述方法进行缺氧模型复制，模型复制成功后，红景天组灌胃诺迪康胶囊CMC-Na溶液，蜘蛛香组灌胃蜘蛛香环烯醚萜CMC-Na溶液，空白组与模型组灌胃CMC-Na溶液，各组灌胃连续7天。治疗期间每日观察大鼠体重、食量、大便性状、活动度、睡眠等一般情况，进行疾病指数评价；治疗结束等待至孕鼠生产，期间每日观察孕鼠体重、食量、大便性状、睡眠情况等一般情况；观察子一代大鼠大脑出生后大体情况，分别对7日龄和30日龄子一代大鼠进行大脑组织大体损伤指数，大脑组织病理切片HE染色观察分级评分；对30日龄子一代大

5、鼠进行Morris水迷宫实验，测定鼠的定位航行和空间搜索能力,以推断子一代鼠的学习记忆能力,检测空间学习记忆功能。3.MeDIP-seq（MethylatedDNAImmunoprecipitationSequencing甲基化DNA免疫共沉淀测序）法差异甲基化分析1万方数据成都中医药大学2017届硕士学位论文动物分组，模型复制及治疗同上。分别取子一代30天大鼠大脑组织，提取大脑总DNA进行MeDIP-seq法差异甲基化分析，在全基因组水平上进行高精度的CpG密集的高甲基化区域研究，快速有效地寻找基因组上的甲基化区域，从而比较不同样本间的DNA甲基化修饰模式的差异。结果：造模中，模型组、蜘蛛香

6、组、红景天组大鼠出现精神萎靡，嗜睡懒动，仰面呼吸，呼吸急促，饮食体重明显下降，活动耐力降低，体毛枯槁杂乱，大便减少等符合大鼠低张缺氧的表现；空白组无上述异常表现。蜘蛛香治疗组实验大鼠食量增加，与空白组大鼠相比无显著差异(P>0.05)，体重在实验结束前尚未达到空白组大鼠体重，但较模型组增加显著(P<0.05)，大鼠反应较灵敏，活动度增加，Morris水迷宫实验结果与空白组无显著差异，但与模型组有显著差异；病理切片HE染色镜下观察大脑海马细胞损伤不明显，与模型组相比差异显著(P<0.05)。与红景天组比较，蜘蛛香治疗组实验大鼠一般状态情况明显好转，体重食量差异无统计学意义（P>0.05），Mor

7、ris水迷宫实验结果二者无明显差异，病理切片HE染色镜下观察无明显差异。MeDIP-seq法差异甲基化分析我们发现缺氧环境可以引起机体发生甲基化修饰，且蜘蛛香环烯醚萜治疗后具有与疾病模型和红景天苷治疗组不同的甲基化修饰。蜘蛛香环烯醚萜对缺氧的干预机制可能和红景天不同。结论：实验选择造模方法合理，成功复制出符合缺氧病变特征的模型。蜘蛛香环烯醚萜治疗效果肯定，与红景天苷相似，也能显著改善缺氧模型大鼠恢