Micro RNA靶向Wnt信号通路抑制肾细胞癌增殖和侵袭作用机制的研究

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1、未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本＇、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学博士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明

2、的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：２０１８年１２月０２日MicroRNA靶向Wnt信号通路抑制肾细胞癌增殖和侵袭作用机制的研究ThemechanismofMicroRNAinhibitsproliferationandinvasionofrenalcellcarcinomacellsthroughtargetingWntsignalingpathway作者姓名：宋海涛专业名称：泌尿外科研究方向：肾癌基因靶向治疗指导教师：孔祥波主任医师学位类别：医学博士培养单位：吉林大学中日联谊医院论文答辩日期：2018年11月27日授予学位日期：年月日

3、答辩委员会组成：姓名职称工作单位主席房学东教授吉林大学中日联谊医院委员麻彤辉教授南京中医药大学医学与生命科学学院李玉新教授东北师范大学生命科学学院柳林教授吉林大学中日联谊医院王辉教授吉林大学中日联谊医院中文摘要MicroRNA靶向Wnt信号通路抑制肾细胞癌增殖和侵袭作用机制的研究背景：肾细胞癌是成人肾脏肿瘤中常见的疾病，大约占肾部肿瘤的90%，在成人癌症中大约占3%。其发病率、死亡率近些年呈现增加趋势。肾细胞癌是一种棘手的癌性疾病，很多患者通常伴随着肿瘤转移及治疗后复发。目前，针对肾细胞癌的发病分子机制还处于未知状态，且缺少有效的治疗手段。所以，针对肾细胞癌分

4、子机制的研究和寻找特异性分子靶向治疗手段成为当前亟须解决的问题。miRNAs是一种没有编码的RNA，长度约为22个核苷酸组成，其可以直接靶向3’-UTRmRNA，直接引起mRNA的降解和抑制翻译过程，在细胞中扮演着调控基因表达的作用。之前很多研究已经证明了miRNAs是癌症发生和发展的主要调控因子，其功能通常为致癌基因或抑癌基因，调控着细胞的分化、侵袭、转移和凋亡。有研究报道在肾细胞癌中有很多的miRNAs功能紊乱，可能参与肾细胞癌的发生。因此，miRNAs是肾细胞癌的潜在诊断和预后判断的生物标记物，同时其也可以作为肾细胞癌的治疗靶点。但是miRNAs在肾细胞

5、癌中扮演的角色以及相关分子作用机制尚不清楚，需要进一步的研究进行探讨。很多研究发现AEG-1在很多种癌症中是一种新型的致癌基因，可以被HIV-1和TNF-α激活。AEG-1在癌症、肥胖和神经退行性疾病中扮演着重要的角色，在很多癌症中存在着AEG-1高表达，如胃癌、肠癌、肝癌、胶质瘤和前列腺癌。后续研究发现AEG-1能激活很多促进瘤体形成的细胞信号通路。AEG-1能激活MAPK通路，特别是ERK通路，活化后的ERK通路交叉靶向作用于Wnt信号通路，而Wnt/β-catenin是多种肿瘤形成的重要通路。Wnt/β-catenin通路中的LEF-1与β-cateni

6、n形成二聚体而活化，Wnt与FZD结合，通过磷酸化灭活GSK3α/β，导致了β-catenin水平增加，引起核内基因的激活进行转录。AEG-1能负调控Wnt的负性调控子APC和CTBP2，同时发现LEF-1抑制后影响了Wnt对IAEG-1调控，能降低细胞的侵袭能力。FZD7是Wnt/β-catenin信号通路的一个主要的共同受体。在很多癌症中都存在异常FZD7的表达和异常Wnt/β-catenin信号通路活化。FZD7通过Wnt/β-catenin信号通路调控癌症的分化、侵袭和转移。肾细胞癌与Wnt/β-catenin信号通路可能有密切的联系，在肾细胞癌组织和

7、细胞株中FZD7有着异常高表达，可能与Wnt介导的肾细胞癌产生有关系。所以，我们认为在肾细胞癌的治疗中通过靶向Wnt信号通路是一种可能的治疗手段。有研究表明miRNAs与多种癌症的形成有关，但其在肾细胞癌中的作用目前还不清楚。所以，本研究以肾癌细胞系为研究对象，探讨miRNAs在肾细胞癌中的作用机制，确定miRNAs（miR-384、miR-613）是否通过靶向Wnt信号通路影响肾癌细胞的转归，进一步确定其是否可以作为一种潜在的新的靶向肾细胞癌治疗方法。方法：第一部分：肾细胞癌中miRNA-384靶向AEG-1的研究1.RT-qPCR法检测肾癌组织和肾癌细胞系

8、中miR-384mRNA的水平；在AC