临床微生物实验室标准化操作

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1、临床微生物实验室标准化操作临床微生物实验室标准化操作及质量控制及质量控制卫生部临床检验中心胡继红2010.4.23重庆临床微生物实验室作用需氧菌（兼性）（苛养、TB、军团）寻找、确认混合感染细菌厌氧菌（内源性感染）感染病原菌微需氧菌（幽门螺杆菌、空肠弯曲菌）支原体肺炎支原体、解脲尿原体真菌念珠菌、隐球菌、霉菌感染控制/治疗放线菌病毒（不能培养）医院内感染、指导治疗社区感染耐药监测药敏试验(细、真、结核、支)新药验证生物安全（消毒、灭菌、个人防护）质量控制指南临床微生物实验室是否能提供准确和具有临床意义的检测信息，是依赖：•标本的质

2、量•试验方法的有效性•试验的操作步骤、试剂、培养基、仪器和人员•报告结果临床微生物实验室质量控制环节标本留取、分析后紧急报告分析前分析前运送标本合格判定培养基、试剂仪器设备基本要求分析中临床微生物实验室质量控制范畴标本分析前的质量控制：微生物学特殊性——得到正确分析结果的基础分析中质量控制：•常规仪器和设备•（成品商业培养基）（诊断抗血清）分析后质量控制：1、临床微生物学“紧急报告值”2、监测报告结果是否正确、清楚、及时。准确报告培养结果的局限性1)与微生物检验人员的专业程度密切相关，能够认识、评价、和追踪有意义的培养细菌；2）可

3、能造成假阴性结果的原因——•延误了培养时间；•培养环境错误，如温度和气体•培养基不支持微生物的生长•病原菌数量很少，或标本量不够检出•WBCs和其他身体免疫因子抑制生长•采集和运输标本不理想•在当时所有培养方法不能培养的微生物准确报告培养结果的局限性3）可能造成假阳性结果的原因——•不同患者标本混淆•报告了污染菌(从实验室或标本采集过程中)4）没有分离到病原菌——也不表明实验室不能检测，其他的疾病也可能有象感染性疾病的症状大量分析前因素影响微生物实验的诊断价值质量控制内容：对收集和运送标本的容器控制:合理的标本采集•无菌向临床提供

4、标本采•无防腐剂集说明(sop)•足够大•安全严密•正确时间•不易碎•部位•运送培养基•方法等•加强无生长因子或保持特定菌的培养基•避免用木质的棉试子对细菌采集时间；有毒害标本来源立即获得足够血液并且开始抗生素治疗•从不同部位获得2-3套血培养(40-60ml血液)•最好在5分钟内采集#1#2阳性率：标本量比采集时间更重要！皮肤不是无菌的定植细菌“污染”血培养静脉穿刺部位的影响4.00%3.50False3.00Positive2.503.8%2.001.501.001.7%0.500.00留置管血外周血Bryant&Strand

5、.1987.Am.J.Clin.Path.88:113-16.Evertsetal.2001.J.Clin.Microbiol.39:3393-4.污染细菌血培养污染定义为在几次血培养中单个血培养下列细菌阳性:•凝固酶阴性葡萄球菌•棒状杆菌•微球菌•丙酸杆菌•芽孢杆菌血培养污染vs.皮肤消毒54.54%污染3.532.521.510.50酒精碘酊聚维酮碘StudiesfromBaylor,Nashville,&France2、正确的运送方式(sop)（运送工具和有效时间及储存方法等）•标本因冷藏及pH改变或在氧气中暴露，可能减少很

6、多种细菌的存活时间脑膜炎球菌，淋病奈瑟菌，流感嗜血杆菌，肺炎链球菌，沙门菌，志贺氏菌，霍乱弧菌，空肠弯曲菌及厌养菌•定量评价细菌数量的培养（尿标本）（运送时间）对环境敏感菌株在运送中数量快速减少时，如果运送时间太长，其它菌则成倍增长，目标细菌可同其它菌一起过度生长。需进行细菌学检测的所有标本，应在收集后2小时内送到实验室分析前常被忽视的重要环节——标本处理同时接收各类细菌学标本处理顺序•首先应考虑标本类型和解剖学来源。•其次要选择每种类型标本应使用的基础分离培养基。•最后选择培养温度和气体条件。•在处理所有标本时，除尿标本外，常规

7、培养都应该在生物安全柜中进行。•最重要的标本必须最先接种培养基。•通过手术等侵入性手段采集的标本要以最快的速度接种培养。•延误接种和处理某些标本会影响培养质量及分离出病原菌的能力。标本预处理总是选择标本最脓的部分接种培养和涂片。1体液（除外尿液）1）正常无菌体液•澄清体液用细胞离心机浓缩涂片•此外培养时，需接种平板和肉汤培养，标本和肉汤比为1:10.•关节和腹腔液标本，标本培养量需10ml.•对于需氧菌，培养时标本接种量大比标本离心后接种培养阳性率更高。•通常关节液和腹腔液接种需氧血培养瓶和厌氧血培养瓶各10ml可提高阳性培养率。

8、2）用试子采集的其他液体标本，接种平板和涂片2试子拒收未使用运送培养基的干燥试子•用试子划平板第一区，如果有两个试子标本，则用另一个涂片。•若只有一个试子，需要接种几个平板，并涂片将试子置于少量肉汤中，并涡旋，将挤干试子，用加样器取标本接种平板和涂