实验五红细胞计数、hb测定ppt课件

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1、实验五一、红细胞显微镜计数二、血红蛋白测定一、红细胞计数红细胞计数指测定单位体积血液中红细胞的数量。显微镜计数法血细胞分析仪法（三）红细胞计数方法红细胞计数指测定单位体积血液中红细胞的数量。显微镜计数法（本节主要学习）血细胞分析仪法1.红细胞显微镜计数法用等渗稀释液将血液稀释一定的倍数后，滴入计数板，在显微镜下计数一定范围内红细胞数，经换算可求得每升血液中的红细胞数。红细胞稀释液Hayem液枸橼酸钠稀释液普通生理盐水或加1%甲醛的生理盐水①Hayem液主要成分及作用：NaCl调节渗透压；Na2SO4调节渗透压，提高比重防止细胞粘连；HgCl2防腐；蒸馏

2、水缺点：遇高球蛋白血症患者，由于蛋白质沉淀而使红细胞易凝集。②枸橼酸钠稀释液主要成分及作用：NaCl调节渗透压；枸橼酸钠调节渗透压，抗凝；甲醛防腐；蒸馏水优点：配制简单，可使红细胞在稀释后较长时间保持正常形态并且不凝集，故应用较广。③普通生理盐水或加1%甲醛的生理盐水急时用。参考值红细胞数（×1012/L）成年男性4.0～5.5成年女性3.5～5.0新生儿6.0～7.0白细胞的影响一般情况下，实际影响较小，可忽略不计；白细胞过高者（WBC＞100×109/L），应校正。实际红细胞数=RBC－WBC；高倍镜下注意识别，计数时勿将白细胞计入。二、血红蛋白测定

3、血红蛋白组成4条珠蛋白肽链4个亚铁血红素分子按不带氧计算，血红蛋白分子量为64458。亚铁血红素无种属特异性；由Fe2+和原卟啉组成；铁原子位于卟啉环中央，具有6条配位键；其中4条与原卟啉中心的4个吡咯环氮原子连接；另2条配位键与血红素分子平面垂直，分别与平面两侧的配体（1个珠蛋白肽链，1个O2）连接。血红蛋白及其衍生物氧合Hb（Hb02）：呈鲜红色；还原Hb（Hbred）：呈暗红色；碳氧Hb（HbCO）：呈樱桃红色；高铁Hb（Hi）：呈红褐色；氰化高铁Hb（HiCN）：呈棕红色，540nm处有一较宽吸收峰。血红蛋白测定方法及评价血红蛋白测定，即测定血液

4、中各种血红蛋白的总浓度。氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白（SLS-Hb）测定法碱羟血红蛋白（AHD575）测定法叠氮血红蛋白（HiN3）测定法溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法血细胞分析仪法（三）血红蛋白测定方法及评价血红蛋白测定，即测定血液中各种血红蛋白的总浓度。氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白（SLS-Hb）测定法碱羟血红蛋白（AHD575）测定法叠氮血红蛋白（HiN3）测定法溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法血细胞分析仪法目前常用方法氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法⑴

5、原理血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白（Hi），Hi再与试剂中CN-结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。HiCN在540nm处有一吸收峰。根据标本的吸光度，即可求得血红蛋白的浓度。转化液1983年全国临床检验方法学学术会议推荐采用文齐氏液。组成及作用:K3Fe(CN)6氧化作用KCN提供CN－离子KH2PO4缓冲液非离子表面活性剂破坏红细胞，防止混浊特点pH7.2±0.2，Hb转化快，5min即可完成，非离子表面活性剂可防止试剂混浊。⑶计算公式Hb(g/L)=A44×100064458×2

6、51=A×367.7A为测定管吸光度44为毫摩尔消光系数64458/1000为1mmol/LHb溶液中所含Hb克数251为稀释倍数⑷优缺点优点ICSH和WHO推荐的参考方法；操作简便、结果稳定可靠；除SHb外其它Hb衍生物均可检测；读取吸光度后可直接定值。缺点试剂中含剧毒药氰化钾；不能测定SHb，对HbCO转化较慢；遇高球蛋白或高白细胞血症试剂易混浊。废液处理水1：1稀释废液敞口放置15h以上CN－氧化成CO2、N2挥发CN－水解成CO32-、NH4+排入下水道加入次氯酸钠35ml/L参考区间成年男性120～160g/L成年女性110～150g/L新生儿

7、170～200g/L临床意义RBC和Hb增多成年男性RBC＞6.0×1012/L,Hb＞170g/L成年女性RBC＞5.5×1012/L,Hb＞160g/LRBC和Hb减少红细胞和血红蛋白低于参考值的下限，为红细胞和血红蛋白减少，通常称贫血。作业红细胞计数时如遇WBC过高，应如何校正？血红蛋白测定的原理、步骤、参考值、临床意义及注意事项？