临床医学论文-螺旋腺瘤临床病理分析螺旋腺瘤临床病理分析

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1、临床医学论文•螺旋腺瘤临床病理分析螺旋腺瘤临床病理分析【摘要】目的:研究高密度壳聚糖(highdensitychitosan,HDC)对小鼠L929细胞的毒性，以期为其临床安全应用提供依据。方法：观察不同浓度HDC浸提液对体外培养L929细胞形态的影响，四甲基偶氮卩坐蓝(methlthiazolyltetrazolium,MTT)实验评价HDC对L929细胞生长和增殖的彩响，流式细胞术(flowcytometry,FCM)检测HDC浸提液对L929细胞凋亡的影响，单细胞凝胶电泳(singlece

2、llgelelectrophoresis,SCGE)检测不同浓度HDC浸提液对培养的L929细胞DNA分子损伤的影响。结果：HDC浸提液对体外培养的L929细胞形态无明显影响，对细胞生长和增殖无明显抑制作用，不同浓度材料浸捉液的细胞毒性均为01级；FCM示凋亡率随浸捉液浓度升高而升高，但不明显;SCGE结果显示HDC对L929细胞的DNA无明显损伤作用。结论：HDC具有良好的细胞兼容性和分子兼容性，可为临床的安全应用提供依据。【关键词】高密度壳聚糖分子生物兼容性单细胞凝胶电泳壳聚糖是一种可被降解

3、吸收、具备良好生物兼容性的高分子材料，具有多种作用[12]o其衍生物高密度壳聚糖(highdensitychitosan,HDC)由于还可被应用丁填补骨缺损、治疗骨折及具比壳聚糖更明显的降血脂等作用而受到重视，并成为医学工作者研究热点之一，但其兼容性评价鲜见报道。随着生物材料兼容性研究逐渐向分子水平的迈进，生物材料评价逐渐进入整体、细胞和分子水平的全面评价阶段。为确保生物材料临床应用的安全性，木研究拟通过形态学观察、四甲基偶氮啤蓝(methlthiazolyltetrazolium,MTT)实验

4、、流式细胞术(flowcytometry?FCM）检测和单细胞凝胶电泳（singlecellgelelectrophoresis,SCGE）来研究HDC浸提液对L929细胞的影响，进而评价HDC毒性、细胞兼容性和分子兼容性，期望能为具临床安全应用提供理论依据。1材料和方法1・1材料HDC（上海优品生物冇限公司提供，脱乙酰度90%）,L929细胞株（购自中科院上海细胞研究所），RPMI1640培养基（GIBC0公司捉供），MTT（美国SIGMA公司提供），低熔点琼脂糖（南京生兴生物技术有限公司提供

5、），荧光显微镜（日本Nikon公司提供）。1.2实验方法1.2.1HDC浸提液制备和实验分组1.2.1.1HDC浸提液制备HDC经紫外照射灭菌后，按试样0.15g-ml-1的质量浓度，在3TC、72h条件下，浸提后过滤除菌保存备用，浸提介质为含10%小牛血清RPMI1640培养基。1.2.1.2实验分组（1）阴性对照组,RPMI1640培养液组；（2）〜（5）25%、50%、75%、100%HDC浸提液组；（6）阳性对照组，0・7%聚丙烯酰胺单体（卩（SCGE实验阳性组为0.01mol-L-

6、lH2O2组）。1.2.2HDC的毒性研处1.2.2.1细胞形态观察0.25彌夷酶消化对数生长期的L929细胞，传代后用含10%小牛血清的RPMI1640培养液及不同浓度（25%、50%、75%>100%）HDC浸提液培养细胞，然后分别于12、24、72h倒置显微镜下观察细胞形态、细胞贴壁情况并拍照。(1)无毒：细胞形态正常，贴壁生长好，细胞呈梭形或不规则三角形。(2)轻度毒性：细胞贴壁生长好，但可见少数细胞圆缩，偶见悬浮细胞。(3)中度毒性：细胞贴壁生长不佳，细胞圆缩较多，达1/3以上，见悬浮

7、死细胞。(4)重度毒性：细胞基本不贴壁，90%以上为悬浮死细胞。1.2.2.2MTT实验实验以RPMI1640培养液稀释100%浸捉液至所需浓度。将L929细胞复苏、传代后，于对数生长期经胰蛋白酶消化制成6X104ml-1的细胞悬液，接种于96孔培养板，24h后换液，72h后加入MTT,4h后加入二甲基亚W(DMSO)，震荡10min后在免疫酶标仪上测定493nm处光密度(opticaldensity,OD)值。计算细胞增殖率(relativegrowthrate,RGR或proliferati

8、onrate,PR)。RGR(%)=实验组OD均值/阴性对照组OD均值X100%o根据RGR进行细胞毒性分级:99WRGRW100吋，细胞毒性为0级；75WRGR<99吋，细胞毒性为1级;50WRGR<75时,细胞毒性为2级；25WRGR<50时,细胞毒性为3级;1WRGRV25时，细胞毒性为4级；OWRGRvl时，细胞毒性为5级。0级和1级被认为没冇细胞毒性，2级为轻度细胞毒性或结合细胞形态综合评价，3级和4级为中度细胞毒性，5级为明显的细胞毒性，35级为不合格材料。1.2.2.3FCM检测细