21红掌种苗组培快繁技术规程02

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1、ICS65.020.20B62DB32江苏省地方标准DBXX/XXXXX—XXXX红掌种苗组培快繁技术规程TechnicalregulationfortissuecultureseedlingsofAnthura（报批稿）XXXX-XX-XX实施XXXX-XX-XX发布江苏省质量技术监督局发布本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定编写。本标准由江苏省农业科学院提出。本标准起草单位：江苏省农业科学院。本标准主要起草人：叶晓青、余建明、梁丽建、贾新平、邓衍明、孙晓波

2、、汤日圣。红掌种苗组培快繁技术规程1范围本标准规定了红掌种苗纽培快繁的设施设备和操作流程。木标准适用于红掌组培苗的生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注FI期的引用文件，仅注H期的版本适用于本文件。凡是不注FI期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。GB/T8321（所冇部分）农商合理使用准则JB/T10594-2006H光温室和塑料大棚结构与性能要求3设施设备3.1场地选择交通便捷、地势平坦、光照充足、通风良好、水电配套、排灌便利的场地进行设施建设。3.2主

3、要设施3.2.1准备室用于玻璃、塑料器皿及其他实验川具的清洗、十燥和保存，夯品的称量、溶解、配制，培养棊的配制、分装、包扎和灭菌，以及植物材料的预处理、培养材料的观察分析等。3.2.2接种室放置超净工作台，开展植物材料的无菌操作，包括外植体的消毒、接种、培养物的转移和试管苗的扩繁、生根等。3.2.3培养室用于接种材料的无菌培养和观察，一般要求温度在25±2°C,光照强度1500Lux〜3000Lux,光照周期12h/12h（光/暗）。3.2.4温室用于试管苗的炼苗、移栽和生长，根据实际情况可选择玻璃温室或

4、薄膜温室，必须具备夏季可调节室内温度至32°C以下，冬季可调节室内温度至15°C以上的条件，可以喷水补湿，并且具有良好的防虫隔离条件。设施建造按JB/T10594-2(X)6中规定执行。3.3主要设备3.3.1准备室设备蒸係水器、冰箱、培养箱、天平、电热磁搅拌器、酸度计、高压蒸汽灭菌锅、烘箱。3.3.2接种室设备超净工作台(水平送风)、双筒实体显微镜或生物显微镜、空调、紫外灯或空气净化装置。3.3.3培养室设备培养架、紫外灯或空气净化装置、空调、自动记录温度、湿度计。4操作流程4.1接种前准备工作4.1.

5、1培养基配制和灭菌以MS培养基为基本培养基，添加琼脂6.0g/L〜6.5g/L,蔗糖30g/L,调节PH值为5.6〜5.8；诱导愈伤培养基：MS+BA0.2mg/L~0.5mg/L+2.4・D2.0mg/L~3.0mg/L+NAA0.1mg/L~0.2mg/L；分化培养基：MS+BA0.5mg/L〜1.0mg/L+NAA0.2mg/L；芽增殖培养基：MS+BAO.1mg/L〜0,5mg/L+NAA0.1mg/L〜0.2mg/L；生根培养基为：1/2MS+NAA0.1mg/L〜0.3mg/L+IBA0」mg

6、/L〜0.3mg/L。培养基配制完毕后，分装至组培瓶中。在121°C下高压灭菌15min〜20min,并尽快取出使其冷却备用。4.1.2超净工作台消毒接种前半小时用70%酒精喷雾、擦洗超净工作台；然后打开用紫外灯照射20min并通风。在点燃酒精灯的情况下严禁用酒精喷雾。4.1.3接种人员的准备①入无菌室前洗手，洗净指甲中的污物。②入室时穿戴上经过消毒的工作服、帽子、口罩和鞋子等。③操作前和操作中经常用70%酒精棉球擦手。4.2外植体接种4.2.1外植体选取和清洗选择纶长健壮、无病虫害的植株作为母株，以其幼

7、嫩的叶片为外植体。外植体在加有适量洗衣粉的H來水屮浸泡丿匸，用自來水冲洗20min〜30min«4.2.2接种工具的消毒将刀和银子等接种工具浸入95%酒精中，使用之询进行燃烧灭菌，然后放凉备用。燃烧时应注意浸入酒精的一端斜向下进行，不可倒置，防止烧伤。4.2.3外植体的灭菌将外植体置于已灭菌的超净工作台上，用无菌的吸水纸吸去水分，放入70%酒梢中表而灭菌15秒，然后再用0.1%的升汞灭菌8min〜lOmin,无菌水浸洗3次〜5次。消毒时间应根据生长季节和材料的带菌程度灵活调整，如果接种示污染严重则相应增加

8、火菌时间。4.2.4材料切割将叶片平放在无菌滤纸上进行切割操作，先用解剖刀沿主脉切开叶片，再将两侧纵切成3mm左右宽的条形，然后横切，使外植体保持3mm左右见方块待用。4.2.5接种接种时以左手拿培养瓶，用右手轻轻取下盖子；将培养瓶口靠近酒精灯火焰处，保存瓶口倾斜，然后用辍子将材料送入瓶屮。接种外植体所川培养棊为诱导愈伤培养棊。接种时，使接种块和培养基紧密接触，并使其在培养容器内分布均匀。接种完毕立即盖好瓶盖并作好标记，注明材