花椰菜毕业论文

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1、摘要1引言11材料与方法31.1材料31.2实验方法31.2.1花椰菜无菌的准备31.2.2不同苗龄的外植体的获得31.2.3AgNOaXJ-不定芽分化的影响31.2.4不定芽的生根培养及再生植株的移栽41.3再生频率与每块外植体再生芽数的计算42结果分析42.1激素浓度对不定芽分化的影响42.2不同基因型和苗龄对不定芽分化的影响52.3AgNO3对外植体分化能力的影响53小结与讨论5谢辞6参考文献7花椰菜下胚轴高频再生体系的建立摘要：木文就NAA浓度、基因型和外植体苗龄的不同对花椰菜下胚轴再生的影响进行了初步的研究与探讨。实验结果表明：单独使用6-BA时，不定芽产生较少，而配合一定

2、浓度的NAA时，不定芽分化率增加。但当NAA浓度大于0.2mg/L时，外植体分化出大量的不定根并很少有不定芽产生。只有在2.0mg/L6-BA和0.05mg/LNAA配合使用，才能达到最佳的诱导效果。关键词：花椰菜下胚轴高频再生体系引言花椰菜又称花菜或菜花，屈于十字花科芸薑屈的栽培植物，原产于地中海北岸，传入我国已有二百多年的历史。目前我国花椰菜种植面积已达35.3万km',居世界第一位。花椰菜所含营养成分极其丰富，每10g花菜含蛋白质2.0g,碳水化合物3-4g,还有矿物质及维生素等多种营养物质，其中Vc含量居十字花科蔬菜Z首。更加可贵的是，莫含有多种口引味类衍生物，可捉高肝脏的芳

3、香疑化酶的活性，能增强分解致癌物质的能力。口从首次在花椰菜愈伤组织上得到再生植株以來，花椰菜组织培养得到迅速发展，现在口J以通过直接分化再生、愈伤组织再生、胚状体再牛、细胞悬浮培养和原牛质体再牛等方式得到再牛植株，而通过子叶、下胚轴和子叶节直接再生可以保持原有品质或亲本的优良性状，这为转基因的顺利进行做了充分的准备。建立高效稳定的植物组织和细胞培养的再生系统是利用农杆菌介导进行植物转基因的重要前提。木实验除了激素成分不同，还存在基因型、外植体类型及部位、苗龄、苗态、培养基和AgNO:i对花椰菜高频再生的影响。1.基因型的影响植物离体形态发生能力与基因型冇着密切的关系，基因型对再生频率

4、冇很大影响。许多研究表明it,甘蓝型油菜较白菜型油菜容易再生与转化，并且甘蓝及其变种较白菜变种容易再生得多。冇研究表明，调控芽形成的基因可能位于C基因组。因此，具有C基因组的甘蓝和花椰菜等容易再生，然而花椰菜再生体系建立的过程中，始终存在基因型决定问题。1.外植体类型及部位可实现再生的花椰菜外植体有了叶、卜•胚轴、叶片、茎段、大田植株的花蕾、花药、原生质体等，而通过子叶、下胚轴和子叶节直接再生可以保持原冇品质或亲木的优良性状，虽然其对农杆菌比较敏感，但因不受吋间的限制，再生率很高,且操作方便，是近年来组织培养和遗传转化应用最多的外植体来源。2.苗龄和苗态在进行花椰菜离体培养时，了叶、

5、下胚轴等外植体的生理年龄也是决定离体培养能否成功的关键因索之一。不同组织由于分化程度、生理状态和处理条件等不同，其分化和脱分化的能力不同，再生的难易程度也不一样。苗龄对外植体的再生有重要的影响，原因可能是细胞在特定的生长发育时期容易进行分化和脱分化。冇学者认为幼嫩的外植体更容易诱导再生芽，分化能力随着苗龄的增加而下降。一般来说无菌苗苗龄为6-7d的下胚轴为最佳外植体。苗龄太长，下胚轴导管细胞的形成不利于芽的诱导；相反，若苗龄太短，则不能获得大量的下胚轴用于实验，且不利于实验操作，容易切到生长点，形成假阳性植株。3.培养基建立良好再生体系的一个主要工作是筛选出最佳培养基。一般花椰菜组织

6、培养采用MS和MSB（MS+B5有机）为基本培养基，除此Z外用于花椰菜组织培养的使用其他培养基进行还未见报道。4.激素成分对于芽的分化最重要的是选择最佳激素组合。一般来说细胞分裂素有利于芽的分化，生长素冇利于根的分化和愈伤组织的形成，细胞分裂素与生长素的比值高有利于芽的分化⑶。6-BA是芸薑属作物转化中最常用的一•种激索，花椰菜、甘蓝等以子叶为外植体吋，单独使用以4-5mg/L为宜，与其他激素结合使用吋浓度应适当减少⑷。严慧玲、潘仰星等［10］用l-3mg/L6-BA和NAA相配合也得到了花椰菜下胚轴较高的分化率。欧阳丽莹、唐章林认为用含2,4-D的培养基对子叶进行预培养，能显著增加

7、芽的诱导频率。对于部分分化能力差，但存在较高分化潜力的外植体，通过预培养中2,4-D的作用，能诱导具分化潜力的细胞进入较强的细胞分裂状态，从而诱导其产生不定芽。添加TDT、CPUU、GA3>ABA等可促进芽的分化或提高再生芽的质量。一般利用组培筛选得到的最佳培养基可以直接用丁•转化实验中，但王晓峰等通过多个tt蓝品种的试验得出子叶柄和下胚轴受农杆菌侵染后再生比常规组培需要较高的生长素浓度，但在花椰菜组织培养转化中没见到类似情况。6.AgNOs的影响植物细胞