课题3　分解纤维素的微生物的分离 (2)

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1、专题2微生物的培养与应用微生物的实验室培养（一）培养基的基本知识1．培养基的营养成分营养物质定义作用主要来源及所涉及的微生物碳源凡是能提供微生物所需碳元素的物质构成生物细胞、生物体及细胞代谢产物，有些能为异养生物提供能源无机化合物：C02、NaHC03等(自养生物)有机化合物：糖类、脂质、花生粉饼、石油等(异养生物)氮源凡是能提供微生物所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物，也可为异养微生物提供能源无机化合物：N2〖固氮菌〗、NH3、铵盐、硝酸盐有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等水分生物体内含量最高的组成成分，分为结合水和自由水良好的溶剂、细胞生活及生化反应的介质、参与物质运

2、输及参与生化反应的反应物培养基、大气、代谢产物无机盐为微生物提供大量除C、H、0以外的各种元素细胞组成成分，生命调节物质，自养菌的能源或其他营养来源，酶的激活剂培养基、大气等环境生长因子微生物正常生长繁殖，必不可少的微量有机物可作为酶与核酸等的组成成分维生素、氨基酸、碱基等高考警示钟自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同(1)自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。但注意根瘤菌这类固氮菌为异养型,可利用N2.(2)含氮无机物不但能给自养微生物提供氮源，也能作为能源物质，提供能

3、量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。2．培养基的配制原则(1)目的明确。要根据微生物的种类、培养目的等选择原料、配制培养基。(2)营养要协调。各种营养物质要保证适当的浓度和比例。营养物质比例过低，不能满足微生物生长；浓度过高则会抑制微生物的正常生长。营养物质的浓度比(如C/N)还会直接影响某些微生物的代谢产物，如谷氨酸生产，C/N=4∶1时，菌体大量繁殖，谷氨酸产量少；而C/N=3∶1时，菌体繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大。(3)pH要适当。不同微生物生长所需pH不同。如细菌pH保持在6.5～7.5之间；放线菌保持在7.5～8.5之间；真菌应保持在5.0～6.0之间。3．培养基的

4、分类及作用：培养基种类很多，作用也不同。根据不同的分类标准，可将培养基分为不同种类。划分标准培养基种类特点用途及实例物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂，如：琼脂观察微生物的运动、分类鉴定、保藏菌种固体培养基微生物分离、鉴定、活菌计数、化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)分类、鉴定用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物(如：培养酵母茵或霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度食盐)鉴别培养

5、基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如可用伊红一美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，茵落呈黑色，并带有金属光泽)5说明：①病毒为非细胞结构的生物体，专营活细胞寄生，目前不能利用人工培养基来培养，需接种在动植物组织中才能增殖。常用于培养病毒的是活鸡胚。②加入培养基中的凝固剂(如琼脂)，一般不能被微生物利用，只起到凝固作用。③选择培养基一般只生长具有特定的微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。注意：选择培养基的选择方法(1)在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐

6、可以得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在主要营养成分完整的基础上加入。(2)改变培养基中的营养成分。例如缺乏氮源时可以分离出固氮微生物；石油作为惟一碳源时，可以分离出消除石油污染的微生物。培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物；(3)改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境下培养，可以得到耐高温的微生物。（二）灭菌技术1．无菌技术的概念在微生物培养中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵，其主要技术是无菌操作。无菌技术是指通过一定物理、化学的手段，防止实验室培养物被外来微生物污染。2．消毒、灭菌的方法项目概念常用方法应用范围消毒使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体表面或

7、内部一部分对人体等有害的微生物(不包括孢子和芽孢)巴氏消毒法：70～75℃水中煮30min或在80℃水中煮15min一些不耐高温的物体如牛奶煮沸消毒法：在100℃水浴中煮沸5～6min一般物品化学药剂消毒法：用乙醇、氯气、漂白粉、KMnO4等药剂来杀死或抑制细菌生长或繁殖可用来对环境、双手和衣物等消毒紫外线消毒法：30W紫外灯照射30min接种室灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法：酒精灯火焰接种工具如接种环