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1、基因治疗的概念基因：编码蛋白质或RNA等具有特定功能产物的遗传信息的基本单位基因治疗（genetherapy）——就是向有功能缺陷的细胞补充相应功能基因，以纠正或补偿其基因缺陷，从而达到治疗的目的。对象：体细胞生殖细胞2基因治疗分类体细胞(somaticcell)基因治疗生殖细胞(germline)基因治疗只限于某一体细胞的基因的改变只限于某个体的当代对缺陷的生殖细胞进行矫正当代及子代基因治疗的必要条件发病机制在DNA水平上已经清楚要转移的基因已经克隆分离，其表达产物有详尽的了解该基因正常表达的组织可在体外进行遗传操作理想的基因治疗还必须：外源基因可有效导入靶细胞外源基因能在靶细胞中长
2、期稳定存留导入基因能适量表达导入基因的方法及载体对宿主细胞安全无害5一、基因治疗的策略内容提要二、基因转移技术四、治疗基因的受控表达三、基因干预五、基因治疗的应用研究6一、基因治疗的策略TheStrategyofGeneTherapy7（一）基因置换（genereplacement）定义：指将特定的目的基因导入特定细胞，通过定位重组，以导入的正常基因置换基因组内原有的缺陷基因。目的：将缺陷基因的异常序列进行桥正。对缺陷基因的缺陷部位进行精确的原位修复，不涉及基因组的任何改变。8又称为基因打靶(genetargeting）定点整合的条件:转导基因的载体与染色体上的DNA具有相同的序列。带
3、有目的基因的载体就能找到同源重组的位点，进行部分基因序列的交换，使基因置换这一治疗策略得以实现。基因同源重组技术9要实现基因置换，需要采用同源重组技术使相应的正常基因定向导入受体细胞的基因缺陷部位。定向导入的发生率约1/100万，采用胚胎干细胞培养的方法，这种同源重组的检出率最高可达1/10。10（二）基因添加基因添加或称基因增补（geneaugmentation）:通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因。类型:在有缺陷基因的细胞中导入相应的正常基因，而细胞内的缺陷基因并未除去，通过导入正常基因的表达产物，补偿缺陷基因的功能；向靶细胞中导入靶细胞本来不表达的基因，利用其表达产物
4、达到治疗疾病的目的。11（三）基因干预基因干预（geneinterference）:采用特定的方式抑制某个基因的表达，或者通过破坏某个基因的结构而使之不能表达，以达到治疗疾病的目的。12二、基因转移技术TheTechniqueofGeneTransferDeliverysystems目的基因被输送至靶细胞后,一般是通过内吞方式进入细胞,并存在于内吞小泡(endosome)中,内吞小泡可以将内容物释放至溶酶体中,后者有丰富的酶系统,可使DNA降解破坏。目的基因必须从内吞小泡释放进入胞浆,并最终进入细胞核中才能实现基因的表达Deliverysystems基因治疗中最关键的技术就是基因的输送
5、或传递。载体在输送基因的过程中要遇到二个主要的障碍：一个是胞外屏障,指载体进入机体到达靶细胞之前所遇到的障碍,包括降解酶系统、吞噬系统、调理化作用和胞外粘膜层等；另一个是胞内屏障,包括靶细胞膜、内吞小泡和细胞核膜等。载体/DNA复合物另外,用于基因治疗的DNA为超螺旋结构或开环结构,空间体积很大,一般难以主动或有效地进入靶细胞。通过与适当载体的结合,DNA的体积可以变为原来的1%以下,这个过程称为缩合(condensation)。缩合可形成具高级有序结构的载体/DNA复合物,有利于DNA对靶细胞的透入,从而提高转染的效率。二、基因的传递系统一个理想的基因传递系统应具备以下重要的性质:①
6、携带性能能携带足够数量的目的基因对机体没有毒性、致病性或免疫原性,具有生物降解性或良好的生物相容性控制基因的释放,延长基因的表达时间,改善基因治疗的效果②安全性③缓释作用理想的基因传递系统④稳定性载体系统本身应稳定,而且要保护携带的基因免受核酸酶等的破坏⑤靶向性能可有效地将目的基因输送至靶细胞内理想的基因传递系统⑥可促进目的基因从内吞小泡释放进入胞浆；⑦可促进目的基因转运入核；⑧可调控基因输入后在体内的表达,因为表达失控的后果将是非常严重的。20基因转移(genetransfer)技术：1.病毒介导的基因转移系统。2.非病毒介导的基因转移系统。211.病毒介导的基因转移系统病毒载体介导
7、的基因转移效率较高，因此它也是使用最多的基因治疗载体。据统计，有72%的临床实验计划和71%的病例使用了病毒载体，其中用得最多的是逆转录病毒载体。22Retrovirus（1）逆转录病毒232425逆转录病毒介导的基因转移系统——由两部分组成：(1)逆转录病毒载体(2)辅助细胞株(如PA317)26逆转录病毒载体的特点①逆转录病毒包膜上由env编码的糖蛋白，能够被许多哺乳动物细胞膜上的特异性受体识别，从而使逆转录病毒携带的遗传物质高效地进入靶细
