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1、青狐尾草丛生芽诱导探究摘要将青狐尾草作为研究C4光合作用的模式植物，其转化体系还不成熟。由成熟种子胚诱导的愈伤组织再生获得植株效率较低，该试验对比含有不同浓度的6-BA和2,4-D诱导培养基对青狐尾草的丛生芽诱导效果，结果表明：改良后的MS培养基并添加6-BA2mg/L和2,4-D0.5mg/L组成的诱导培养基效果较好。因此，为青狐尾草的遗传转化寻找到一种比较好的转化对象。关键词青狐尾草；丛生芽；6-BA；2,4-D；诱导培养基中图分类号Q943.1文献标识码A文章编号1007-5739(2012)
2、22-0153-01青狐尾草是NADP-ME型的C4植物，为单子叶植物［1］,是研究C4光合作用方面具有较大潜能的模式植物［2］。但在单子叶植物的遗传转化中，利用组织培养获得再生植株效率很低。因此，该试验探索了丛生芽的诱导浓度。1材料与方法1.1种子的灭菌及播种用次氯酸钠溶液灭菌后，将种子稍稍晾干，用药匙均匀撒在MS基本培养基上。1.2外植体获得将培养皿放在培养箱中置于（23±2）°C.黑暗条件下萌发。3~4d后种子开始萌发，在胚轴生长到0.5~2.0cm时,切取幼苗的芽尖放在诱导培养基上诱导丛生芽
3、。根据姜素云等黑麦草丛生芽的培养方法[3],设置了含有不同浓度6-BA和2,4-D的诱导培养基（表1）。MS基本培养基选用康奈尔大学Burtnell实验室培养青狐尾草愈伤组织的MS基本培养基配方。1.3培养条件培养的条件为：18h时光照，6h黑暗；光照强度为600~800lx；温度（23±2）°CO2周后形成丛生芽块，可看到明显膨大的叶鞘。将叶鞘和幼叶剥离丛生芽块，计算丛生芽的芽原基数及芽尖数。2结果与分析播种在基本培养基上的青狐尾草种子暗培养3〜5d后，大部分开始萌发。在黑暗条件下，下胚轴伸长较快
4、，在芽轴长度小于2cm时将0.5mm的芽尖切下摆放在诱导培养基上,每皿可摆放25个芽尖。在丛生芽的诱导过程中，外源激素的浓度配比非常重要。通过统计诱导出的芽尖数和平均芽原基数，选择效果较好的浓度。通过对比发现，当2,4-D浓度为0.5mg/L.6-BA浓度为2mg/L时，产生丛生芽的芽尖数、平均芽原基数最多。因此，选择培养基G为诱导培养基（表2）。3讨论在诱导培养过程中，2,4-D与细胞分裂有关，6-BA与植株再生细胞的分化有关[4-6]o通过对比不同激素组合的诱导培养基的诱导效果，在不含2,4-D
5、和6-BA的培养基中，芽尖很快褐化死亡；在6-BA浓度低于2mg/L、2,4-D浓度低于0.5mg/L时，产生丛生芽的芽尖数较少，大部分芽尖死亡；当6-EA浓度高于2mg/L时，不管2,4-D浓度高低,芽尖切口产生的白色细胞团较小，细胞分裂少，进而产生的丛生芽芽原基很少，而且芽尖容易生长成为绿色叶片，不再具有分裂能力；当6-BA浓度适宜、2,4-D浓度过高时，芽尖切口细胞能力较强，容易分裂膨大为一个细胞团，水渍化严重，后期不容易转变为丛生芽，分化能力不强。通过对比发现，当2,4-D浓度为0.5mg/
6、L、6-BA浓度为2mg/L时,产生丛生芽的芽尖数、平均芽原基数最多。因此，选择该激素组合添加入诱导培养基中，其与已有的再生体系相比，青狐尾草丛生芽获得再生植株比较容易，被认为是一个比较好的转化材料[7-9]o4参考文献[1]KELLOGGEA.PhylogeneticaspectsoftheevolutionofC4photosynthesis[M]//RFSAGE,MONSONRK,C4PlantBiology.SanDiego,CA：AcademicPress,1999：411-444.[1]
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