组培实验指导

《组培实验指导》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、植物细胞组织培养实验指导（修订版）园艺专业适用德州学院农学系2010年12月实验一植物组织培养实验室参观及消毒一、目的要求通过实验，使学牛熟悉组织培养中所涉及的各种仪器和器皿用具，树立组织培养的无菌意识；掌握组织培养实验室器皿的洗涤与灭菌方法。二、仪器与材料用具1、仪器超净工作台、空调机、高床灭菌锅、冰箱、光照培养箱、电磁炉、天平、烘箱筹设备以及各种培养器皿、各种实验器皿和各种器械用具。2、材料用具：新洁尔灭、高镭酸钾、甲醛、70%酒粘、洗涤剂、喷雾器、工作服、口罩和手套等。三、方法步骤1、集屮介绍组织培养实验室守

2、则及有关注意事项。然后讲解木次实验的目的、仪器设备和器皿用具。2、讲解组织培养实验宗的构建情况，包括缓冲室、无菌操作室和培养室的设计要求以及内部仪器设备的名称及作用；准备室的各种仪器设备和器皿用具的名称与用途。3、地面、墙壁和工作台的灭菌将配好的2%新洁尔火溶液或其它消毒液倒入喷雾器屮，对地面、墙壁、如落均匀喷雾。在喷房顶时，注意不要让药液滴入眼睛。4、无菌室和培养室的灭菌首先将房子关闭，然后用10ml甲醛和高猛酸钾的配比液进行熏蒸。操作时耍戴好口罩和手套，操作时要注意避开烟雾。5、培养器皿的洗涤为灭菌将培养器皿先

3、用肥皂水或洗衣粉浸泡儿小吋，然后用清水冲洗，最后用蒸绸水冲遍，烘T后备用。四、实验报告1、将本次实验内容整理成实验报告。2、每人设计一个植物组织培养实验室的构建方案。3、简述组织培养实验室的灭菌过程为注意事项。实验二MS培养基母液的配制与保存一、目的要求通过MS培养基母液的配制与保存，掌握配制为保存培养基母液的基本技能。二、材料与用具配制MS培养基母液所需要的药品、生长调节物质、天平、烧杯、容量瓶、量筒、蒸懈水、95%的酒精或O.lmol/L的NaOH、O.lmol/L的HCL、试剂瓶、标签、冰箱。三、方法步骤1、

4、母液的配制（1）母液1（大量元素）的配制称量：用电子天平称取下列药品，分别放入烧杯。NII.NOs33gKNOs38gMgSO4.7H207.4gKHJO3.4g混合：用少量蒸憾水将药品分别溶解,然后依次混合。定容：加蒸僻水定容至1000ml成20倍液。（2）母液2（钙盐）的配制称量：用电子天平称取CsCL2・2比022.Ogo定容：加蒸饰水定容至500ml成100倍液。（3）母液3（铁盐）的配制称量：用电子天平称取下列药品，分别放入烧杯。Na2-EDTA1.865g;FeSO>・7FM1.390g混合：用少量蒸饰

5、水将药吊分别溶解后混合。定容：加蒸饰水定容至500ml成100倍液。（4）母液4（微量元素）的配制称量：用电子犬平称取卜-列药品，分别放入烧杯。H：3030.31gNaMoO；・2H200.0125gMnSOi・4比01.115gCuSO.；・5比00.00125gKT0.0415g混合：川少量熬谓水将药品分别溶解，然后依次混介。定容:加蒸饰水定容至1000ml成50倍液。（5）母液5（有机）的配制称量：川电子天平称取下列药品，分别放入烧杯。肌醇5.0gVB..0.025g甘氨酸0.lgVBi0.005g烟酸0.0

6、25g混合：用少量蒸锚水将药品分别溶解后混合。定容：加蒸佛水定容至250ml成200倍液。（7）植物生长调节物质母液的配制称量：川电子天平称取生长索或细胞分裂索50-100mgo溶解：生长素用少量95%的酒精或0.lmol/L的NaOH溶解,细胞分裂素用0.lmol/L的HCL加热溶解。定容：加蒸馅水定容至100ml配制成0.5-lmg/mL的溶液。2、母液的保存（1）装瓶：将配制好的母液分别倒入试剂瓶中，贴好标签，注明培养基名称、母液倍数与配制口期。（2）储藏：将母液放在4°C冰箱中备用。四、实验报告将木次实验内

7、容整理成实验报告，并叙述实验过程屮的注意事项。实验三MS固体培养基的制备与灭一、目的要求通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能及高压灭菌技术.二、材料用具MS培养皐的各种母液、生长调节剂母液、琼脂、蔗糖、蒸馅水移液管、容量瓶、电磁炉、PII试纸、0.lmol/1的氢氧化钠、0.lmol/1的盐酸、培养瓶、标签、铅笔、高压灭菌锅。三、方法步骤1、按母液顺序和规定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量蒸懈水的量筒。母液一50ml母液二10ml母液三10ml母液四20ml母液五5ml2、加入生长调节物质：加入量与

8、视不同培养物的不同而不同，有时也可不加。3、加入琼脂7g/lo4、加蒸镉水定容至lOOOmlo5、在电磁炉上煮沸，不断搅拌，使琼脂熔化。6、调PH值至5.8-6.2之间7、分注：把培养棊分注到培养瓶中，每瓶20-35nil。盖好盖，贴上标签，注明培养基的种类、时间等。8、把装有培养基的培养瓶放到高压灭菌锅里灭菌20分钟，灭菌压力为108Kpa,温圜121°C