化学发光实验步骤

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1、羟自由基清除实验(芬顿反应)溶液配制检测仪器反应过程注意事项溶液配制Na2CO3-NaHCO3缓冲液(CBSS,0.1mol/L):Na2CO3Mr=105.99,0.1mol/L溶液为10.599g/L;NaHCO3Mr=84.01,0.1mol/L溶液为8.401g/L;pH10.2Na2CO3:NaHCO3(6:4)Fe2+SO4-EDTA(3mM):100mlH2O加入Fe2+SO4·7H2O0.08346g,EDTA0.0877g0.1MNaOH:0.2gNaOH加入到50mlH2O.0.

2、1mMluminol溶液:10mMluminol储液,88.585mgluminol溶于少量DMSO中,加0.1MNaOH定溶至50ml.0.1mMluminol,1ml10mMluminol加99mlCBSS(pH10.2).3%H2O2:100μl30%H2O2加900μlH2O检测仪器检测仪器:WDD-1型发光测试仪(北京第二光学仪器厂)检测条件:电压:读数调零后,该仪器电压调至主针(内圈)8,副针(外圈)6.反应过程0.1mMluminol溶液880μl100μl样品(对照为H2O)10μl

3、Fe2+SO4-EDTA(3mM)10μlH2O2(3%)注意事项H2O2溶液应当低温避光保存检测过程中,反应溶液均在冰浴中保存更佳Fe2+SO4-EDTA和H2O2溶液,均分开贴在检测管管壁,开始记时时摇匀开启反应.样品混匀后,记录30S后的读数.超氧阴离子清除实验(邻苯三酚自氧化)溶液配制检测仪器反应过程注意事项溶液配制0.1mMluminol溶液:10mMluminol储液,88.585mgluminol溶于少量DMSO中,加0.1MNaOH定溶至50ml.0.1mMluminol,1ml10

4、mMluminol加99mlCBSS(pH10.2).4MNaOH:1.6gNaOH+10mlH2O3mM邻苯三酚:H2O,用HCl调pH值为3.5;0.3M邻苯三酚,0.037833g邻苯三酚,加入1mlpH3.5的H2O中,3mM邻苯三酚,10μl0.3M邻苯三酚+990μlH2O(pH3.5).反应过程0.1mMluminol溶液810μl100μl样品(对照为H2O)80μlNaOH(4M)10μl邻苯三酚(3mM)检测仪器检测仪器:WDD-1型发光测试仪(北京第二光学仪器厂)检测条件:电压

5、:读数调零后,该仪器电压调至主针(内圈)10,副针(外圈)0.注意事项实验过程中,邻苯三酚溶液需冰浴中保存邻苯三酚溶液碱性条件下容易氧化,若对照数值有较大变化,则需配制新溶液3mM邻苯三酚溶液,贴在检测管管壁,开始记时时摇匀开启反应.样品混匀后,记录8S(记录时间也可以自己摸索)后的读数.