交联聚乙烯吡咯烷酮微生物限度检查方法验证

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1、交联聚乙烯毗咯烷酮微生物限度检查方法验证交联聚乙烯毗咯烷酮微生物限度检查方法验证方案########有限公司验证目录1引言1.1概述1.2验证小组成员2药品名称3试验用菌种耍求与类别4培养基5试液6验证方法依据7操作方法8结论1引言：开始H期：年月H结束日期：年月日验证部门：化验室2药品名称：交联聚乙烯毗咯烷酮产品批号：生产企业：上海风鸿贸易有限公司3试验用的菌种要求与类别：耍求：验证试验所用的菌株传代次数不得超过五代。类别：①大肠埃希菌[CMCC(B)44102]%1金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]%1枯草芽砲杆菌[CM

2、CC(B)63501]%1白色念珠菌[CMCC(B)98001]%1黑曲霉[CMCC(B)98003]4培养基：%1胆盐乳糖培养基%1改良马丁培养基%1改良马丁琼脂培养基%1营养肉汤培养基%1营养琼脂培养基%1玫瑰红钠琼脂培养基%1伊红美兰琼脂培养基5试液：PH7.0氯化钠■蛋白腺缓冲液配制方法：取磷酸二氢钠3.56g、磷酸氢二钠7・02g、氯化钠4.4g、蛋白月东lg、加纯化水1000微热熔解，分装，121°C高压灭菌20分钟。6验证方法依据：《中国药典》2005版二部，有关微生物限度检查方法验证试验7操作方法：7.1菌液制备(1

3、)取经37°C培养18-24°C,金黄色葡萄菌、大肠埃希菌、枯草芽孑包杆菌的肉汤培养物lml+9ml0.9%无菌氯化钠溶液,10倍稀释至10-5-10-7,细菌数约为50-100cfu/ml,做活性菌计数备用。(2)取经25°C培养1&24小时的口色念珠菌改良马丁培养物lml+9ml0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5-10-7,细菌数约为50-100cfu/ml,做活性菌计数备用。(3)取经25°C培养1周的黑曲霉斜面培养物，加3-5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱，然后，吸储抱子悬液(用管口带有薄的无菌棉花或纱布能

4、过滤菌丝的无菌毛细管)至无菌管内，吸取lml+9ml0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5-10-7,细菌数约为50-100cfu/ml,做活性菌计数备用。7.2供试液储备称取样品10g,加0.1%蛋口月东氯化钠稀释液(PH70)90ml浓度均为1:10供试液，分别人工污染上述5种代表试验菌株。7.3回收率测定(1)试验组取1:10供试液lml和50-100个/ml试验菌株同时加入平1111中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，待凝固后，置规定温度培养24-72小吋观察结果。(2)菌液组测定所加的试验菌数。(3)

5、供试品对照组测试供试甜本底菌数。(4)稀释剂对照组稀释液1ml和50-100个/ml试验菌。7.4控制菌检查方法的验证(1)试验组取供试品液10ml及10-100cfu/ml大肠埃希菌加入增菌培养基屮，依相应控制菌检查法进行测定。(2)取供试甜液10ml及10-100cfu/ml金黄色葡萄球菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行测定。7.5结果(1)结果、按上述做四组试验，在规定的条件下培养后计数，计算回收率，回收率不得低于70%。稀释剂对照组的回收率二稀释剂对照组平均菌落数/菌液组平均菌落数试验组的回收率二(试验组平均菌落数■

6、供试品对照组)/菌液组平均菌落数(2)常规法结果，在交联聚乙烯毗咯烷酮微生物限度检杳法的验证结果见表1、2、3表1菌落计数表2表3从表1、2、3结果可以看出，采用常规法检验交联聚乙烯毗咯烷酮供试詁，人工污染代表菌株，该供试品对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽泡杆菌、白色念珠菌、回收率试验均高于70%,可以采用常规方法检验。(2)控制菌检结果试验组检出试验菌，阴性对照组未检出阴性对照组菌。按此控制菌检查法进行的该控制菌检查法方法可行。8结论：