UPLC色谱柱技术介绍

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1、培训教程(UPLC色谱柱)©2014WatersCorporation1内容提要
ACQUITYUPLC色谱柱背景知识简介–色谱柱基础知识介绍–UPLC色谱柱技术–VanGuard™保护柱
如何选择ACQUITYUPLC色谱柱–ACQUITYUPLCBEH色谱柱–ACQUITYUPLCHSS色谱柱–ACQUITYUPLCCSH色谱柱–NEWCORTECS色谱柱
色谱柱使用维护©2014WatersCorporation2Waters公司是LC色谱柱的原产厂家原产厂家化学键合厂柱填充厂分销商Source&controlofsilicagelcanmakeabigdifference

2、硅胶颗粒和inyourchromatography杂化颗粒合成填料键合填料键合柱填充柱填充柱填充分拨与销售分拨与销售分拨与销售分拨与销售Waters•ManufacturesundercGMP,ISO9001andISO13485guidelines•RegisteredwithFDAasamedicaldevicemanufacturer©2014WatersCorporation3沃特世质量控制体系以可靠的柱性能使长期项目和分析方法的风险最小化
沃特世自主研发和生产高纯硅胶与杂化颗粒，从起始的单体材料开始，直至成品
按每批1-2Kg的较小规模生产，以便严格准确地控制影响工艺变

3、化的参数
制造工厂经认证依从cGMP规范、ISO9001以及ISO13485©2014WatersCorporation4内容提要
ACQUITYUPLC色谱柱背景知识简介–色谱柱基础知识介绍–UPLC色谱柱技术–VanGuard™保护柱
如何选择ACQUITYUPLC色谱柱–ACQUITYUPLCBEH色谱柱–ACQUITYUPLCHSS色谱柱–ACQUITYUPLCCSH色谱柱–NEWCORTECS色谱柱
色谱柱使用维护©2014WatersCorporation5C18填料的合成—1.硅胶基质的合成（多孔）硅胶颗粒基质硅羟基PolyethoxysilaneTetraetho

4、xysilane(PEOS)(TEOS)©2014WatersCorporation6硅胶的孔结构
孔占据大于99%填料表面被测物分子推荐使用的量(MW)填料孔径<3,00060-130Å(6-13nm)3,000–125-200Å10,000(12.5-20nm)>10,000300–1,000Å(30-100nm)非常大无孔填料Si-OH=硅羟基(Silanol)注意：：孔径是分布值：孔径是分布值©2014WatersCorporation7130Åand300Å1.7umBEHParticles（（（电镜照片）©2014WatersCorporation8填料的合成—2.键

5、合配体（（键合相（键合相）填料的内孔表面色谱填料是多孔颗粒（（（“（“““海绵海绵”””），99％％％发生色谱分离的表面％发生色谱分离的表面是在内孔表面流动相必须允许流动相进入内孔以保证待分析和分离的化合物Analyte能够和色谱填料有保留©2014WatersCorporation9C18填料的合成—3.端基封尾键合相(配体)：C18端基封口基团残留硅羟基硅胶基质©2014WatersCorporation10对色谱柱填料的了解(一)
键合相化学–影响化合物的分离度：α–不同键合相对不同种类的化合物分离不同–可能导致色谱的分离机理不同–如：C18、C8、CN©2014Water

6、sCorporation11选择性差异来源
填料的品牌-不同硅胶颗粒基质o密度，表面积，孔径o纯度(残留硅羟基活性不同)
键合相的种类:C18,C8,ShieldRP18…
不同C18配体键合水平o单键键合,双键键合,三键键合o配体覆盖率(疏水性不同)©2014WatersCorporation12对色谱柱填料的了解(二)
填料的端基封口
封口残余硅羟基
减少不可逆吸附或拖尾
增加碳含量（0.1%-1%）©2014WatersCorporation13对色谱柱填料的了解(三)
含碳量o含碳量越高，k'值越大（固定相传质效应增加）
高含碳量o有利于不易保留的化合物的分离o水解稳定性

7、好，重现性好o有利于极性化合物的拖尾改善
低含碳量o有利于分析中性及碱性化合物o降低溶剂损耗©2014WatersCorporation14对色谱柱填料的了解(四)
平均颗粒度，颗粒度分布–颗粒度o颗粒度越小：柱效越高(传质好，涡流扩散小)柱压越高(渗透性差)–颗粒分布o颗粒分布越宽:柱效低(渗透性差)–颗粒形状o球型:柱效高、重现性好、柱床结构均匀o无定型：柱床结构不均匀,流动相线性速度不均匀谱带扩展©2014WatersCorporation15对色谱柱填料的了解(五)
硅胶