魏氏梭菌毒素酶联免疫分析

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1、魏氏梭菌毒素酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。96T使用目的：木试剂盒用于测定相关样木屮魏氏梭菌毒素表达。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中魏氏梭菌毒素表达。用纯化的魏氏梭菌毒素抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品屮魏氏梭菌毒素相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的魏氏梭菌毒索抗体结合，形成抗体•抗原•酶标抗休复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酣的催化卜•转化成蓝色，并在酸的作用卜•转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度

2、（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中魏氏梭菌毒素的存在•否。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlXl瓶2酶标试剂6mlX1瓶8阳性对照0.5mlXI瓶3酶标包被板12孔X8条9阴性对照0.5mlXI瓶4样品稀释液6mlX1瓶10说明书1份5显色剂A液6mlXl瓶11封板膜2张6显色剂B液6inlX1/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行捉取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于・20°C保存，但应避免反复冻融2.不能检测

3、含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孑L（空口对照孔不加样詁及酶标试剂，其余各步操作相同）2.加样：分别在阴、阳性对照孔屮加入阴性对照、阳性对照50M1o然后在待测样品孔先加样品稀释液40卩1,然后再加待测样品10Plo加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3.温育：用封板膜封板后K37°C温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸憎水30倍稀释后备用5.洗涤：小

4、心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50pl,空口孔除外。7.温育：操作同3。1.洗涤：操作同5。2.显色：每孔先加入显色剂A50pl,再加入显色剂B50yl,轻轻震荡混匀，37°C避光显色15分钟.3.终止：每孔加终止液50卩1，终止反应（此时蓝色立转黄色）。4.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，3

5、7°C反应30分钟计算和结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值d.oo；阴性对照平均值S0.10临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定：样品0。值＜临界值（CUTOFF）者为魏氏梭菌毒素阴性阳性判定:样品OD值彳临界值（CUTOFF）者为魏氏梭菌毒素阳性O注意事项1.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号纽分不得混川。1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15・30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结品析岀，稀释时可在

6、水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。4.底物请避光保存。5.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm6.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用吋必须注意安全。保存条件及有效期1•试剂盒保存：；2-8°Co2.冇效期：6个刀