小鹅瘟病毒分离与初步鉴定

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1、小鹅瘟病毒分离与初步鉴定胡桂学高光邹啸环肖峰摘要：取死于具有小鹅瘟典型症状的7日龄吉林白鹅脾脏，制成乳剂，接种于未免疫小鹅瘟疫苗的健康母鹅所产种蛋的12日龄鹅胚尿囊腔。结果当盲传至第Era3代，鹅胚死亡,电镜负染尿囊液观察到细小病毒样粒子。雏鹅接种实验结果表明，试验组雏鹅表现岀小鹅瘟临床症状和剖检特征。由此证明，该雏鹅死于小鹅瘟。关键词：小鹅瘟；细小病毒；分离鉴定IsolationandPrimaryIdentificationofGooseParvovirusofGoslingPlaqueAbstract:Withdaysgooseembryopro

2、ducedbyhealthygeese,astrainofviruswasisolatedfromthespleenof7-daysoldgoslingdiedfromgoslingplaque.Itwasparvolikevirusobservedclinicsignsofgoslingplague.Theresultshowedthattheisolatedviruswasgooseparvovirus.Keywords:goslingplaque;gooseparvovirus;isolationandidemtification小鹅瘟是由鹅细小

3、病毒引起的4〜20日龄雏鹅的急性败血性传染病，传播速度快，死亡率高，对养鹅业危害极大。2001年5月，吉林省大安市某养鹅场7日龄吉林口鹅大批死亡。笔者对送检雏鹅进行了病毒分离，初步鉴定为细小病毒感染。动物回归实验表明，该分离病毒对易感雏鹅的致病性强，现将结果报道如下。1材料与方法1.1材料1.1.1病料为2001年5月吉林省大安市送检的7日龄吉林白鹅。主诉：雏鹅及母鹅未接种过小鹅瘟疫苗或免疫血清。雏鹅死前腹泻严重，粪便呈绿色，频死期角弓反张。剖检见小肠内有栓子，切面轮层状。无菌操作取另一只具有同样症状的雏鹅肝、脾于无菌平皿内。1.1.2鹅胚购自长春某孵

4、化场，种鹅未免疫小鹅瘟疫苗。选取12日龄鹅胚用于病毒分离。1.13雏鹅购自长春某小鹅瘟清净场，4口龄。种鹅和雏鹅未免疫小鹅瘟疫苗或高免血清。1.2方法1.2.1病料处理与鹅胚接种将病料于无菌平皿内剪碎，十字匀浆器研磨，用无菌生理盐水（内含青、链霉素各1万IU/ml）制成10倍乳剂,5000r/min离心lOmin,上清液置于4°C冰箱过夜。次日接种于12日龄鹅胚尿囊腔，0.2ml/胚，37°C继续孵化5d,每天照蛋，弃去24h内死亡鹅胚，及时收取24〜120h死亡鹅胚放于4°C冰箱。1.2.2尿囊液收取与剖检常规方法收取尿囊液。注意观察鹅胚头、四肢和内

5、脏病理解剖变化。1.2.3病毒传代将尿囊液离心，取上清以灭菌生理盐水做50倍稀释，同121法接种鹅胚，盲传5代。1.2.4电镜负染观察取出现病变鹅胚尿囊液，1000r/min离心lOmin,上清液置于铜网上，2%磷鹄酸负染1〜2min,于JME-100EA【川口本）透射电镜观察并照相。1.2.5雏鹅接种试验取20只4日龄雏鹅，随机分成试验组和对照组，每组10只，隔离饲养。试验组雏鹅皮下接种病变鹅胚尿囊液，1ml/只。对照组雏鹅皮下接种无菌生理盐水，1ml/只。逐日观察接种鹅临床症状，及时剖检死鹅，观察剖检变化。2结果2.1病毒分离结果盲传至第3代，鹅胚

6、对于72〜96h死亡。剖检鹅胚，见绒毛尿囊膜水肿，胚体翼和爪末端有明显的出血点，胚头、眼两侧充血严重，喙部有点状出血。心肌苍口，胚肝有坏死灶。2.2电镜负染观察结果由电镜负染照片可见，病毒粒子直径约20nm,呈多角形，无囊膜,具有典型的细小病毒特征。2.3雏鹅接种试验结果雏鹅接种试验结果见表表1雏鹅接种试验结果Table1.Inoculationresultsofgosling组别101接种后天数/d23456789试验10/1010/107/105/105/103/102/102/101/101/10对照10/109/109/109/109/109/

7、109/109/109/109/10注：表中数据为存活只数/接种只数由表1可见，试验组雏鹅于接种后第2d开始死亡，第4〜10d死亡逐渐增多，1只耐过。对照组于接种后第2d死亡1只，为鹅笼网夹死，剖检无明显病理变化。试验组雏鹅接种后2d开始发病，表现为精神萎顿，食欲减退，直至废绝，鼻腔有粘液，排出绿色混有气泡粪便，仰卧或弓角反张而死。剖检3〜4日龄病死鹅，仅见肠黏膜严重充血、出血，肝、脾微肿。4〜10口龄死亡雏鹅，小肠粘膜脫落，凝固，剖开冋盲部见有白色栓子，质地坚硬，将肠腔堵塞，胆囊膨大充满胆汁，肝脏黄色，新冠状沟有针尖大小点状出血。耐过雏鹅上涨缓慢，发

8、育不良。对照组雏鹅健康，未岀现临床症状。3讨论、小鹅瘟是一种严重威胁养鹅业的急性传染病，仅发生