01微生物限度检查方法验证方案

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1、微生物限度检查方法验证方案微生物限度检查方法验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年刀日2.验证小组成员：3.验证方案审核部门审核人II期生产部生产年间QCQA4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理1.1验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定木方案。验证过程应严格按照木方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。1.2原理通过比较试验4组中试验菌的恢复牛•长结果來评价整个检验方法的准

2、确性、有效性和重现性。2.验证方法步骤2.1验证前的准备：进行微生物限度检查方法验证前，所冇的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。试验菌丿应包括G、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基木覆盖样品中可能存在的微生物。2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检杏方法是否对产品有影响。2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性,试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对

3、照组的菌回收率应不小于70%,试验组回收率也不低于70%o3.试验实施3.1试验前的准备3.1」主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级(或放置同等级净化工作台)。操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pao3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：培养基名称培养基批号配制日期有•效期至改良马丁琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基

4、胆盐乳糖增菌培养基营养琼脂培养基3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠■蛋白陈缓冲液以上经115°C高压蒸汽灭菌30mino3.1.6验证用微生物名称及英编号实验菌株的來源：菌株名称内控编号人肠埃希菌CMCC(B)44102Ec-金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003Sa-枯草芽抱杆菌CMCC(B)63501Bs-口色念珠球菌CMCC(F)98001Ca-黑曲®CMCC(F)98003An-编号由菌名首字母一传代代数一制备口期组成。3.1.7器具：无菌薄膜过滤器：(孔径0.45um直径50mm)、无菌

5、移液管(5ml)4.验证方法4.1菌液的制备将人肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽砲杆菌接种至l()ml的无菌营养肉汤屮在3()〜35°C下培养18〜24小时，将白色念珠菌接种至改良马丁液体培养基中，在23〜28°C下培养24〜48小时。将黑曲霉接种至改良马丁液体培养基中，在23〜28°C下培养5〜7天。将上述培养物用0.9%的无菌氯化钠溶液制成每lml含菌落数为50〜lOOcfu的菌悬液。4.2实验方法供试液的制备：取样品l()g(ml)加入无菌PH7.0氯化钠■蛋白豚缓冲液100ml,振摇使分散均匀

6、口，或用匀浆仪混匀口，制成1：10均匀的供试液。A样品试验组取1：10供试品(相当于lg或lml供试on)lml,及各50〜lOOcfu的试验菌，分别注入平皿中,立即倾注琼脂培养基。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽砲杆菌倾注肉汤琼脂培养某；白色念珠菌、黑曲霉倾注玫瑰红钠琼脂培养基。B菌液纽取上述制备菌液lml注入平皿屮，金黄色匍萄球菌、人肠杆菌、枯草杆菌加入肉汤琼脂培养基，白色念珠菌、黑曲霉加入玫瑰红钠琼脂培养基。C供试品对照组取上述1：1()供试液lml注入平1JIL+，分别倾注肉汤琼脂培养基和玫

7、魂红钠琼脂培养基。D稀释剂对照纽1RPH7.0氯化钠■蛋白月东缓冲液各lml及各50〜lOOcfu的试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌倾注肉汤琼脂培养基；白色念珠菌、黑曲霉倾注玫瑰红钠琼脂培养基。4.3培养将人肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽殖杆菌在30〜35°C卜培养48小时，将白色念珠菌、黑曲霉在23〜28°C下培养72小时，点计菌落数。1.试验结果5」产品试验组微生物生长检查情况：批号：菌种名称产品试验组计数结果(cfu/lllL)平均值大肠埃希

8、菌金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌白色念珠菌黑曲霉5.2供试品对照组微生物生长检查情况：批号：菌种名称供试詁对照组计数结果(cfu/皿)平均值大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌白色念珠菌黑曲霉5.3稀释剂对照组微生物生长检查情况：批号：菌种名称稀释剂对照组计数结果(cfu/皿)平均值人肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌口色念珠菌黑曲霉5.4菌液组微生物生长检查情况：批号：菌种名称菌液组计数结果(cfu/lllL)平均值大肠埃希菌金黄色衙萄球菌枯草芽泡杆菌白色