基因操作技术重点考纲

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1、1.载体的定义？载体：指携带外源基因进入受体细胞的运载工具，它的本质是DNA复制子。2.载体必须具备的3个基本条件?载体的碱基对越多越好？（1）基本条件：1具有复制子，能在宿主细胞内自主复制，并携带重组DNA分子一同扩增；（2）2具有单一限制性内切酶的酶切位点或多克隆位点；（3）3有合适的选择标记基因，用来筛选重组DNA。3.载体的碱基对越少越好，否则容易错配.4.目前研究最深，使用最多的载体有？目前研究最深、使用最多的载体是经过改造的质粒载体和噬菌体载体。5.按功能分，有哪些载体？克隆载体的概念？表达载体的概念？（1）按功能分，可分为

2、克隆载体、表达载体、测序载体、转化载体、穿梭载体、多功能载体等。（2）克隆载体：携带插入外源片段的质粒或噬菌体，从而产生更多物质或蛋白质的产物。（3）表达载体：在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、PBS、终止子），使目的基因能够表达的载体。6.选择标记有哪些？插入失活、a-互补是什么意思？（1）选择标记有插入失活和a-互补（2）插入失活:若把外源DNA片段插入到载体的选择标记基因中而使基因失活，丧失其原有的表性特征。（3）a-互补：单独存在的a及w片段均无β半乳糖苷酶活性，只有宿主细胞与克隆载体同时共表达两片段时，宿主细胞

3、内才有β半乳糖苷酶活性，使特异性作用物变为蓝色化合物。7.列举常用的质粒载体名称？PBR322质粒、PUC载体、TA克隆载体8.噬菌体的溶原状态是指？噬菌体感染大肠杆菌时，可能进入一个溶菌循环，结果导致细胞的裂解，释放出噬菌体颗粒；或者进入与宿主不同程度的稳定状态。9.噬菌体DNA由哪三个部分组成？目的基因插入哪个部分？（1）噬菌体DNA由左臂、中臂、右臂三部分组成。（2）目的基因插入中臂（非必须区）部分。10.超级载体的特点？有哪些超级载体？1）超级载体的特点：运载量大（2)超级载体：YACs、BACs11.表达载体与克隆载体有什么最

4、大的区别？表达载体有强大的启动子和SD序列，而克隆载体没有1.限制性内切酶限制性内切酶：能识别DNA分子上的特定位点并将双链DNA切断的酶2.DNA连接酶，T4连接酶DNA连接酶：一种能够在两条DNA链之间催化5’-P和3’-OH形成磷酸二酯键的酶T4连接酶：连接黏性末端或平末端的酶3.DNA聚合酶，Taq聚合酶DNA聚合酶：催化脱氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）聚合成DNA的酶Taq聚合酶：从嗜热水生菌中分离纯化出来的4.逆转录酶逆转录酶：又称依赖于RNA的DNA聚合酶，是分子生物学中最重要的核酸酶之一。5.核酸酶，DNase,Rnas

5、e核酸酶：通过切割相邻两个核糖酸残基之间的磷酸二酯键，从而导致核酸分子发生水解断裂的蛋白酶DNase:即脱氧核糖核酸酶，特异水解断裂DNA分子的酶RNase:即核糖核酸酶，专门水解断裂RNA分子的酶6.碱性磷酸酶，细菌性/小牛肠碱性磷酸酶碱性磷酸酶：有两种不同来源的碱性磷酸酶：一种是从大肠杆菌中纯化出来的，叫做细菌碱性磷酸酶；一种是从小牛肠中纯化出来的，叫做小牛肠碱性磷酸酶。它们能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。细菌碱性磷酸酶：一种是从大肠杆菌中纯化出来的，叫做细菌碱性磷酸酶小牛

6、肠碱性磷酸酶：一种是从小牛肠中纯化出来的，叫做小牛肠碱性磷酸酶7.DNA与基因的区别？基因是有遗传功能的DNA片段8.DNA的链是通过什么方式连接的？两条DNA单链是通过什么键连接在一起的？（1）磷酸二酯键；（2）氢键9.DNA中四种碱基对的名称？A（腺嘌呤）、G（鸟嘌呤）、C（胞嘧啶）、T(胸腺嘧啶）10.DNA和RNA的区别？（1）DNA是脱氧核糖核酸；RNA是核糖核酸；（2）这两种核糖的区别在于脱氧核糖2’-碳原子上的羟基被脱了氧，只剩下H，这个区别使得DNA比RNA更具有化学稳定性1.遗传信息是如何表达（翻译、传递）的？P182

7、.mRNA,tRNA,rRNA的功能分别是什么？mRNA功能：信使tRNA功能：转运rRNA功能：核糖体RNA存储3.基因突变有哪几种类型？染色体畸变(1.染色体结构变异2.染色体数目变异)，点突变-----基因突变(错义突变、同义突变、无义突变)4.操纵子的概念？概念：在细菌中，一组基因受一个启动子控制，被转录成一个长的RNA分子，这样的一组基因成为操纵子。5.简述乳糖操纵子的作用机理？P471、无乳糖时，调节基因lacI 编码阻遏蛋白，与操纵基因O 结合后抑制结构基因转录,不产生代谢乳糖的酶，使结构基因不表达。2、只有乳糖存在时,乳

8、糖可与lac阻遏蛋白结合，而使阻遏蛋白不与操纵基因结合，诱导结构基因转录，代谢乳糖的酶产生以代谢乳糖，使结构基因可以表达。3、葡萄糖和乳糖同时存在时，葡萄糖与启动子结合，不予理睬乳糖，不会使蛋白四聚体失活，