血球计数板的使用

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1、血球计数板的使用姓名原理血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其体积为0.1mm3。计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=

2、400个小方格组成。每一个大方格边长为1mm，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3血球计数板的使用方法（以计数酵母菌为例)：1 样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。2 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。3 将稀释后的酵母菌悬液用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入。多余的菌液用吸水纸吸取。稍待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数室内。4 计数时，如果使用16格×25格规格的计

3、数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数；如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。5 当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞)。6 对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。计算公式：(1)16格×25格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板

4、计算公式：酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数7血球计数板的清洁：血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷。洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止例题:(2012年江苏27).蓝藻、绿藻和硅藻是湖泊中常见藻类。某课题组研究了不同pH对3种藻类的生长及光合作用的影响，实验结果见图1、图2，请回答下列问题：（1）根据图1和图2分析，3种藻类中pH适应范围最广的是      ，在

5、pH为8.0时，3种藻类中利用CO2能力最强的是       。（2）在培养液中需加入缓冲剂以稳定pH，其原因是          。（3）在实验中需每天定时对藻细胞进行取样计数，请回答下列问题：①取出的样液中需立即加入固定液，其目的是              。②在计数前通常需要将样液稀释，这是因为              。③将样液稀释100倍，采用血球计数板(规格为1mm×1mm×0.1mm)计数，观察到的计数室中细胞分布图见图3，则培养液中藻细胞的密度是              个/mL。【答案】（1）绿藻   蓝藻（2）藻类

6、生长代谢会改变培养液pH（3）①维持藻细胞数目不变②藻细胞密度过大③1×108【解析】（1）由图1、图2可知，pH改变后绿藻的生长速率和光合速率变化不大，其次是蓝藻。由图2在pH为8.0时，蓝藻的光合速率最大，利用CO2能力最强。（2）藻类植物在光合作用时大量吸收CO2，代谢过程产生一些物质会改变培养液的pH。（3）①取样后向样液中加入固定液来杀死细胞，维持藻类细胞数目不变；②由于样液藻类细胞的密度比较高，稀释后方便计数；③血球计数板规格为1mm×1mm×0.1mm，采用五点取样法，取四角和最中间的5个中方格计数，采取“数上线不数下线，数左

7、线不数右线”的原则处理，平均每个中方格内有4个酵母菌。计数区有25个中方格，共计有酵母菌4×25=100个。(上图中的五个红色方格）计数区体积为1mm×1mm×0.1mm=0.1mm3=0.1×10-3 mL，换算成1mL，则有酵母菌100×104个，再乘以稀释倍数100，结果为108个。