血清尿素氮的测定

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1、血清尿素氮的测定【目的要求】1.了解血清尿素氮测定的方法及临床意义。2.复习尿素的生成机理及其意义。【实验原理】血清（或血浆）中的尿素，在尿素氮试剂的酸性环境中与二乙酰-肟（DAM）共沸后，可缩合成一红色化合物，称为fearon反应。其颜色的深浅与血清（或血浆）中尿素的含量成正比，与同样处理的尿素氮标准液比色，即可测算出血清（或血浆）中尿素氮的含量。【实验材料】1.器材刻度吸管（0.1ml、2ml、10ml）恒温水浴箱分光光度计2.试剂（1）待测血浆（2）尿素氮试剂（3）二乙酰-肟试剂（4）尿素氮标准液【操作步骤】取试管三支按下表操作试管试剂（ml）测定管标准管空白管1：4稀释血清0.1（

2、或血浆）尿素氮标准液（0.02mg/ml）0.1蒸馏水0.1二乙酰-肟0.50.50.5尿素氮试剂5.05.05.0混匀，置沸水浴中加热15min，立即用自来水冷却5分钟。分光光度计选用540nm波长，以空白管调零点，读取各管吸光度。计算及结果分析测定管吸光度标准管吸光度尿素（mg%）=×尿素氮标准液浓度*5(mg/ml；mg/100ml)【注意事项】1.此法灵敏度高，用量极微（一般只需0.02ml血清即可）。本实验是先将血清用生理水以1：4加以稀释再取0.1ml，故最后计算时，应乘以稀释倍数“5”2.试剂中加入硫胺脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象（小于5%/h）

3、。3.此法操作简单，特异性强，不受其他非蛋白质含氮化合物如尿酸、肌酸等影响，但应控制好实验条件。4.吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务必准确。5.尿液中的尿素氮也可用此法进行测定。由于尿液中尿素氮含量高，标本需用蒸馏水以1:50稀释。如果呈色后吸光度仍超过本法的线性范围，还需将尿液再稀释，重新测定。【思考题】血清尿素氮测定的方法及临床意义。