植物细胞骨架-实验课件.ppt

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1、植物细胞骨架的光学显微镜观察实验目的实验原理实验用品实验方法步骤实验结果与分析作业细胞生物学实验课件一、实验目的掌握考马斯亮蓝R250对植物细胞骨架染色的方法。通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。二、实验原理细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。本试验采用去垢剂TritonX-100的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞

2、骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。三、实验用品材料：洋葱器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、擦镜纸、50ml烧杯1.磷酸缓冲液（10XPBS）NaCl80gNa2HPO4·2H2O0.6gKCl4gKH2PO40.6g蒸馏水1000mL试剂试剂2.M-缓冲液：50mmolL-1(PH 6.7)咪唑、50mmolL-1KCl0.5mmolL-1MgC12、1mmolL-1EGTA0.1mmolL-1EDTA、1mmolL-1巯基乙醇4mmolL-1甘油、pH：7.2。3.1%Triton-X100:用M-缓冲液配制。4.3%戊二醛

3、：用pH6.8的磷酸缓冲液配制。5.0.2%考马斯亮蓝R250染液：0.8g考马斯亮蓝R250、46.5ml甲醇、7ml冰醋酸 、46.5ml蒸馏水。四、实验方法步骤1.撕取洋葱鳞茎内表皮1cm2若干片，置于小烧杯中。2.用磷酸盐缓冲液（pH6.8）提前浸泡2小时左右。3.吸去磷酸缓冲液，用1%TritonX—100处理20分钟。抽提细胞骨架以外的蛋白质，从而使骨架图像更加清晰。4.吸去TritonX-100，用M—缓冲液洗3次，每次5分钟。M－缓冲液有稳定细胞骨架的作用。5.用磷酸缓冲液（pH6.8）洗2次，每次10分钟。6.考马斯亮蓝R250染色30分钟。7.蒸馏水洗2次。9.置于载玻

4、片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察。五、实验结果与分析：绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。简述制备细胞骨架中使用磷酸盐缓冲液、M缓冲液、TritonX-100、考马斯亮蓝250作用。六、作业1.对实验结果的分析，所观察到的细胞骨架是胞质骨架中的哪种类型，为什么？2.TritonX-100和M缓冲液的作用是什么？3.实验中的注意事项。