血红蛋白测定的实验

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1、血红蛋白测定【实验目的】掌握血红蛋白测定的临床意义熟悉毛细管采血过程，分光光度计的操作了解血红蛋白测定的注意事项【实验原理】血液在血红蛋白转化液中表面活性剂的作用下溶血后，血红蛋白（除SHb外）被高铁氰化钾（K3Fe（CN）6）氧化为高铁血红蛋白（Hi），Hi再与氰化钾（KCN）中的氰离子（CN-）结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。HiCN最大吸收波峰在540nm,最小吸收谷为504nm。可用分光光度计直接测定或用HiCN标准液比色法测定。即可求出待测血红蛋白浓度。此法称HiCN法。【试剂】血红蛋白转化液（文齐氏液，Vankampen

2、-Zijlstra’液）：氰化钾50mg，提供氰离子（CN-）高铁氰化钾200mg，氧化剂无水磷酸二氢钾140mg，缓冲液成分，维持溶液的pH值，【实验操作】    （1）取一支试管加入5.0mlHiCN试剂，取全血20μl，加入到5.0mlHiCN试剂中，混匀后静置5min，使血红蛋白转化完全。    （2）分光光度计，波长540nm，比色杯光径1.0cm，杯温20-300C，以蒸馏水或空白转化液调零，测定样品吸光度值（A）。【计算】根据比尔定律，浓度与吸光度成正比，所以实际操作中我们还可以直接用待测液的吸光度A测/标准液的吸光度A标＝待测液的浓度

3、C测/标准液的浓度C标来直接计算待测液的浓度。【参考值】男性：120~160g／L，女性：110~150g／L，新生儿：170~200g／L。【临床意义】照书上写图1红细胞和血红蛋白的生理变化曲线红细胞计数医学决定水平：高于6.8×1012/L，应采取相应治疗措施；低于3.5×1012/L可诊断贫血；低于1.5×1012/L应考虑输血。