愈伤组织培养.ppt

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1、愈伤组织的诱导与分化愈伤组织的形态发生愈伤组织培养的应用愈伤组织的继代培养复习思考题愈伤组织培养植物组织培养愈伤组织培养植物组织培养第五章愈伤组织培养植物组织培养愈伤组织源出于自然生长的植物受损伤时，在愈合伤口处长出的一团瘤状突起，瘤状突起内的细胞相对于植物体成熟细胞已发生脱分化的变化。这一概念后来被引入植物组织培养领域。培养中的愈伤组织是指从外植体的内部或切口表面形成的一团没有分化的组织，这种组织具有再分化的能力。愈伤组织第五章愈伤组织培养愈伤组织培养将母体植株上的各个部分切下作为外值体，接种到无菌的培养基上，

2、进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。一般情况下，植物组织均能诱发形成愈伤组织。愈伤组织培养第一节愈伤组织的诱导与分化愈伤组织培养一、愈伤组织的诱导二、愈伤组织细胞的分化一、愈伤组织的诱导愈伤组织培养植物由细胞构成，细胞是生物结构和生命活动的基本单位，具有全能性，即一个植物细胞能产生一个完整植株的固有能力，或植物细胞具有全套遗传信息，不论是性细胞还是体细胞，在特定环境下能进行表达，而产生一个独立完整的个体。第一节愈伤组织的诱导与分化一、愈伤组织的诱导愈伤组织培养全能性的体现一个已分化的细胞若要表现其全能性，首先

3、要经历脱分化过程，然后再经历再分化过程。脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。第一节愈伤组织的诱导与分化一、愈伤组织的诱导不同外植体的比较：一般双子叶植物比单子叶和裸子植物诱导愈伤组织容易；幼年细胞和组织比成年细胞和组织容易；二倍体细胞比单倍体细胞容易。第一节愈伤组织的诱导与分化胡萝卜愈伤组织一、愈伤组织的诱导愈伤组织培养在进行愈伤组织培养中，应根据不同的培养目的，获取不同的外植体。外源激素是植物愈伤组织诱导过程中不可缺少的组成成分。第一节愈伤组织的诱导与分化二、愈伤组织细

4、胞的分化从单个细胞或外植体上形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：（一）诱导期（二）分裂期（三）分化期第一节愈伤组织的诱导与分化二、愈伤组织细胞的分化再分化：愈伤组织在一定的培养条件下又可以经过胚胎发生形成双极性的胚状体，或经过器官发生形成单极性的芽或根，进而重新形成完整的植株，这后一段过程一般称为再分化。第一节愈伤组织的诱导与分化二、愈伤组织细胞的分化从单个细胞或外植体上形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：（一）诱导期（二）分裂期（三）分化期第一节愈伤组织的诱导与分化二、愈伤组织细胞的分化

5、愈伤组织培养（一）诱导期：诱导期又称起动期，指细胞准备进行分裂的时期。由于接种的植物材料的组成细胞通常都是成熟细胞，处在静止状态，一般不进行分裂。诱导期的长短，因植物种类和外植体的生理状况及外部因素而异。菊芋1d，胡萝卜几天，不同的光照条件，诱导情况不同，一般弱光易于诱导，且分裂频率高。第一节愈伤组织的诱导与分化二、愈伤组织细胞的分化愈伤组织培养外源激素是愈伤组织诱导过程中不可缺少的组成成分，是一种诱导剂，能诱导细胞开始分裂，外源生长物质往往是通过调整它的种类和浓度来诱导细胞开始分裂的。最常用的有2，4－D、NA

6、A、IAA和细胞分裂素等。2,4－D处理静止状态的组织时，细胞的RNA含量明显增加，而且2，4-D可积累在分裂细胞的核仁中。组织的机械损伤也作为一种刺激因素诱导细胞开始分裂，愈伤组织往往出现在伤口处。有些天然提取物对愈伤组织的诱导和维持十分有益，常用的有椰子汁（10％），0.5％的酵母提取物，5％～10％的番茄汁。第一节愈伤组织的诱导与分化二、愈伤组织细胞的分化愈伤组织培养离体培养的细胞在分裂前发生的变化：①在切离和培养后较短时间内，细胞的气体交换迅速增加，特别是在加有生长素的培养基中培养时，比无生长素的培养基中

7、气体交换增加一倍。②多聚核糖体不断增加。截止M期前，每个细胞中的RNA含量增加到300％；③蛋白质发生周期性的积累。每个分裂细胞的总增加量约为200％；④酶活力也发生一定的变化。DNA复制前，DNA聚合酶活力增加；分裂前，与代谢有关的酶类，如己糖激酶和一些脱氢酶的活力也增加。第一节愈伤组织的诱导与分化愈伤组织培养（二）分裂期分裂期指细胞通过一分为二的方式，不断增生子细胞的过程。外植体的细胞一但经过诱导，细胞脱分化，其外层细胞开始细胞分裂。①细胞的数目迅速增加。胡萝卜组织培养7d后，细胞数可增加10倍。②每个

8、细胞平均鲜重下降。这是由于鲜重的增加赶不上细胞数目的增加之故。二、愈伤组织细胞的分化第一节愈伤组织的诱导与分化愈伤组织培养③正在分裂的细胞体积小，内无液泡，如同根尖和茎尖的分生组织细胞一样。④细胞的核和核仁增大到最大。⑤细胞中的RNA含量减少，而DNA含量保持不变。⑥随着细胞不断分裂和组织生长，组织的总干重、蛋白质和核酸含量大大增加，新细胞壁的合成极快。处于分裂期的愈伤组