核酸的酶促降解和核苷酸代谢.ppt

《核酸的酶促降解和核苷酸代谢.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第八章核酸的酶促降解和核苷酸代谢第一节核酸的酶促降解第二节核苷酸的降解第三节核苷酸的合成代谢核酸磷酸核苷酸核苷磷酸-戊糖碱基水解核酸酶核苷酸酶核苷磷酸化酶何处去？进入磷酸戊糖途径或重新合成核酸？分解合成第一节核酸的酶促降解DNARNA外切酶内切酶特定部位的—限制性内切酶核酸酶（一）按底物分：DNA酶，RNA酶，有的酶可作用于DNA和RNA（二）按作用方式分：3’-核酸外切E：如蛇毒磷酸二酯E从3’－OH端开始，生成5’-核苷酸5’-核酸外切E：如牛脾磷酸二酯E从5’－OH端开始，生成3’-核苷酸1、核酸外切E：从核酸链的一端逐个

2、水解下核苷酸的酶（非特异性的）外切核酸酶对核酸的水解位点5´ppppOHBpppp3´BBBBBBB牛脾磷酸二酯酶（5´端外切5得3）蛇毒磷酸二酯酶（3´端外切3得5）2、核酸内切酶：特异水解DNA或RNA分子内的磷酸二酯键的酶(特异性强)。如：牛胰核糖核酸酶：切嘧啶核苷3’－磷酸与相邻核苷酸的3’，5’－磷酸二酯键，生成３’－嘧啶核苷酸ＲＮaseT1水解鸟苷酸二酯键，生成３’－ＧＭＰBBPyBGBBBHOPPPPPPPOH牛脾磷酸二酯E蛇毒磷酸二酯E牛胰核酸E(RNaseI)RNaseT1内切核酸酶对RNA的水解位点示意图5´p

3、pppOHPyPuPyPy1´pppGACUpppGA3´RNAaseIRNAaseIRNAaseT1RNAaseT1Pu：嘌呤Py：嘧啶RNAaseT1专一性强限制性内切酶定义：细菌内存在的一类能识别水解外源双链DNA的核酸内切酶。这些酶主要是从细菌中分离得到，能识别特定的核苷酸顺序，但在细菌本身的DNA中，这些顺序已被甲基化，因而不被水解，也就是说这些酶仅限于水解外源DNA以保护自身，故称限制性酶。限制酶都以内切方式水解DNA产物：5’为P，3’为OH限制酶的作用特点：①专一性很强；(对特定核苷酸顺序专一性，而非对一种或几种碱

4、基专一），②对底物DNA有特异的识别位点;③这些位点的长度一般在4-8碱基对范围;④底物通常具有回纹结构;⑤切割后形成粘性末端或平末端。回文结构：DNA局部双螺旋以某一对称轴旋转180。后，与另一侧的互补片段的顺序完全相同的DNA结构粘性末端：双链DNA分子经限制性酶作用后，每条单链的一端带有识别顺序中几个互补碱基，这样的末端称～。5’…pGAATTCp…3’EcoRI5’…pGAATTCp…3’3’…pCTTAAGp…5’3’…pCTTAAGp…5’3、核酸内切兼外切酶：例：核酸酶P1，先内切再外切常用的DNA限制性内切酶的专一

5、性酶辨认的序列和切口说明‥‥AGCT‥‥‥‥TCGA‥‥‥‥GGATCC‥‥‥‥CCTAGG‥‥‥‥AGATCT‥‥‥‥TCTAGA‥‥‥‥GAATTC‥‥‥‥CTTAAG‥‥‥‥AAGCTT‥‥‥‥TTCGAA‥‥‥‥GTCGAC‥‥‥‥CAGCTG‥‥‥‥CCCGGG‥‥‥‥GGGCCC‥‥BamHIAluIBglIEcoRIHindⅢSalISmaI四核苷酸，平端切口六核苷酸，平端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口限制性内切酶的命名和意义EcoRI序号属名种名株名例

6、：EcoRI，这是从大肠杆菌（Ecoli）R菌珠中分离出的一种限制性内切酶限制性内切酶是分析染色体结构、制作DNA限制图谱、进行DNA序列测定和基因分离、基因体外重组等研究中不可缺少的工具，是一把天赐的神刀，用来解剖纤细的DNA分子。第二节核苷酸的降解一、核苷酸的降解核苷酸酶核苷酸核苷H2OPi核苷磷酸化酶核苷水解酶碱基+戊糖-1-P碱基+戊糖（所有生物体）（植物、微生物，且只对核糖核苷作用）二、嘌呤的降解腺嘌呤脱氨酶次黄嘌呤黄嘌呤氧化酶鸟嘌呤脱氨酶黄嘌呤黄嘌呤氧化酶尿囊素尿酸(哺乳动物）（人类、灵长目）尿囊酸尿素CO2+NH3三

7、、嘧啶的降解尿嘧啶胞嘧啶胸腺嘧啶二氢尿嘧啶β-脲基丙酸二氢胸腺嘧啶β-丙氨酸β-脲基异丁酸β-氨基异丁酸CO2+NH3主要发生在肝脏，常因各种抑制物甚至生理紧张导致其中的某些酶缺乏，影响细胞生长。“从头合成”途径（通常情况下占95%）核糖、氨基酸、CO2、NH3、Pi核糖核苷酸辅酶RNA脱氧核糖核苷酸DNA“补救”途径(脑和骨髓)内外源核酸分解核苷碱基、Pi脱氧核苷核酸类补品原理所在可提高康复速度第三节核苷酸的合成代谢嘌呤核苷酸嘧啶核苷酸小分子化合物小分子化合物PRPPIMP（具嘌呤环）乳清酸（具嘧啶环）AMPPRPPXMPGMP

8、UMP(黄嘌呤核苷酸）一、核糖核苷酸的合成嘌呤碱天冬氨酸谷氨酰胺甘氨酸甲酸甲酸CO2（一）嘌呤核苷酸的合成1、“从头合成”途径嘌呤环的元素来源：CH2OPOOHOHOHCH2OPOO-P-POHOH5-磷酸核糖（R-5-P）5-磷酸核糖-1