岛津液相维修培训.ppt

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1、欢迎参加岛津液相维修培训班采用“HPLC”级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相匹配流动相的选择其他问题其他问题水的等级纯化水蒸馏水去离子水波长(nm)纯化水去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物吸光率其他问题水/MeOH梯度ODS柱鬼峰GradientCurve1ml/min,0-100%MeOHover10minsandholdfor15mins.鬼峰的出现其他问题溶剂的等级HPLC级优级纯分析纯都经过蒸馏和0.

2、45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质微量分析、梯度洗脱其他问题甲醇乙睛正己烷分析纯级和HPLC级溶剂的吸光度比较图其他问题溶剂的过滤滤膜类型：聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂脱气：除去流动相中溶解或因混合

3、而产生的气泡气泡对测定的影响：1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形3）检测器中的气泡产生基线波动其他问题脱气的目的1.防止由气泡的产生引起的故障2.防止由溶解（在液体中的）气体量的变动引起的检测不稳定程度1）示差折射率检测器*使折射率变化2）UV检测器（200nm以下）*溶解氧气有吸收3）荧光检测器*溶解氧气有消光作用其他问题其他问题脱气的方法1.超声波脱气法2.He清除法3.使用氟树脂膜的减压脱气法其他问题He清除法调压阀排气阀往送液泵流动相过滤器其他问题氟树脂膜

4、真空室往送液泵真空泵控制器流动相使用氟树脂膜的减压脱气法梯度洗脱法梯度洗脱装置：高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。梯度洗脱：优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度梯度洗脱法的注意点溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差梯度混合的溶剂互溶性要好梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）查

5、看空白实验的数据。遵守分析周期。（最初的分析数据不采用）样品处理1.使用流动相溶解样品--减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要--保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀其他问题缓冲液选择缓冲液的步骤1.确定最佳分离状态时的流动相pH2.选择具有与流动相的pH相近的pKa的缓冲液（即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液）3.确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收（在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和柠檬酸的缓冲液）一些代表性弱酸的pKapK1pK2pK3醋酸4.87柠檬酸3.1

6、34.766.40磷酸2.167.2112.32其他问题缓冲液的使用使用前必须过滤使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀、磨损、阻塞:用纯水冲洗30-60min（1ml/min），再用甲醇冲洗30min易受到细菌和霉菌的影响不能直接用有机溶剂冲洗液相色谱容易出问题的部件维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器手动进样器检测器管线选择材料不锈钢TeflonPEEK(聚醚酮)尺寸0.1mmI.D.x1.6mmO.D.0.3mmI.D.x1.6mmO.D.0.5mmI.D.x1.6mmO.D.0.8mmI.D.x

7、1.6mmO.D.管线材料不锈钢(可用于所有连接)能承受几千kg/cm2压力酸性或高浓度盐环境中易腐蚀(尤其在pH小于2时)PEEK(可用于所有连接)能承受高达250kg/cm2压力可在整个PH范围(pH1-14)内使用不适用于高溶解性溶剂如氯仿等Teflon(用于柱后阻尼管、反应管和排液管)化学惰性大能承受5kgf/cm2压力材料：不锈钢烧结，孔径10um故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用5％～20％的稀硝酸，超声波清洗，再用蒸馏水清洗注意点：吸滤头拆下时不必将塑料管剪断吸滤头液相色谱容易出问

8、题的部件LC-10ATvp泵：串联式往复泵LC-10ADvp泵：并联式往复泵液相色谱容易出问题的部件液相色谱容易出问题的部件单向阀结构抛光面透明塑料垫片宝石球吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头流动相单向阀原理吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头液相色谱容易出问题的部件故障1：宝石球粘附于垫片表现：泵无法吸液或排液，流路不通措施：1）用针筒抽出口单向阀以产生负压，使宝石球与垫片分开2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超