动物毒理学实验3 皮肤刺激性试验.ppt

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1、实验三急性皮肤刺激试验目录试验原理试验目的试验材料试验方法结果分析方法评价试验原理局部刺激试验是毒理学试验中的一项重要内容，对可能具有局部刺激作用的化学物必须进行此项试验，但对具有强酸（pH≤2）或强碱（pH≥11.5）性质的化学物不需做本试验，因为这些化学物属于腐蚀性物质。另外，已知具有高毒性的化学物也不必进行皮肤刺激试验。皮肤刺激试验又称皮肤原发性刺激试验。试验目的了解受试化学物对皮肤的直接刺激作用以及刺激强度。试验材料——实验动物实验动物：成年白色家兔或白色豚鼠，首选白色家兔。在皮肤刺激试验中

2、，动物品种的选择很重要。目前多选用兔和豚鼠，对于强刺激或无刺激作用的化学物选用家兔检测效果好，但对作用缓和的刺激性化学物，选用豚鼠所获得的试验结果较准确。试验材料——受试化学物受试化学物：应用受试化学物原液或根据需要原液稀释成若干个不同浓度的稀释液，也可应用受试化学物的细粉。每小区皮肤的应用剂量为液体受试化学物0.3~0.5ml（84液），粉状受试化学物0.1~0.5g（洗衣粉）。试验材料——其他脱毛剂大头针、纱布、棉球、胶布、塑料薄膜移液器、天平试验方法——脱毛在动物脊柱两侧或躯干中部用化学药品脱

3、去被毛准备好脱毛区。脱毛方法：先将被毛剪短，然后在所需部位涂上一薄层脱毛剂，2~3min后用玻璃棒刮去被毛，并用温水清洗脱毛剂，纱布擦干。采用局部全封闭斑贴法或局部半封闭斑贴法进行皮肤刺激试验。试验方法——局部全封闭斑贴法当以动物背部脊柱两侧的皮肤做受试部位时，先将其两侧脱毛区分成若干个小区，小区面积的总和应约为动物体表面积的1/10。将其中一侧的各个小区，分别用大头针在皮肤上划一“#”字形擦伤，以观察受试化学物对损伤皮肤的刺激作用；另一侧用以观察受试化学物对完整皮肤的刺激作用。将受试化学物原液及不

4、同浓度的稀释液，分别直接涂敷于受试皮肤的若干个小区，然后在各区皮肤上放一块4~6层的纱布块或其他半吸水性惰性物（1cm×1cm或直径为1cm）。试验方法——局部全封闭斑贴法固体药剂可直接加到皮肤上，再用湿纱布覆盖或是放于预先浸湿的皮肤上，也可将糊状受试化学物涂于纱布块上，再将其贴于皮肤上，然后在纱布块上覆盖一层较大的不透气的塑料薄膜，用胶布和绷带固定。经4~8h后，除去斑贴物，每24h观察一次各小区皮肤的局部反应，连续观察4d，按皮肤刺激反应评分（表1），定量地评定受试化学物对皮肤局部刺激作用的强度

5、。红斑通过肉眼观察，水肿通过轻轻触摸的方法来评分。表1皮肤刺激强度反应评分皮肤反应强度评分A.红斑和焦痂形成无红斑0极轻微红斑（勉强可见）1边界清晰的红斑（明显红斑，淡红至鲜红色）2中等至严重的红斑（鲜红至深红色）3极严重红斑（深红至紫红色），并有焦痂形成（真皮层受损）4B.水肿形成无水肿0极轻微水肿（勉强可见）1轻度水肿（边缘明显地高出周围皮肤）2中度水肿（水肿区高出边缘皮肤约1mm）3严重水肿（水肿区高出边缘皮肤1mm以上，面积超出斑贴区）4试验方法——局部半封闭斑贴法本法与局部全封闭斑贴法不同

6、之处在于：1.每组的白色家兔数不应少于3只；2.采用纱布作斑贴物，在无刺激作用的前提下，用半封闭敷料固定；3.斑贴不需要在擦伤皮肤上进行；4.斑贴4h，然后去掉斑贴并清洗皮肤，观察0.5h、1h、24h、48h和72h后的皮肤反应。皮肤刺激反应评分同全封闭法。结果分析将表1中A项和B项评分结果相加，凡总分低于2分者可视为无刺激性或轻度刺激性；2~6分之间者具有中等刺激性；6分以上者具有强刺激性。刺激性极强的物质，试用前需经适当稀释后再进行斑贴，如稀释用的溶剂本身具有刺激作用，则需作溶剂对照试验。另外

7、，也可按表2中的标准来判断试验结果。表2皮肤刺激强度分级标准皮肤刺激强度分级皮肤局部反应评分无刺激性无异常改变0轻度刺激性充血、红斑<2中等刺激性红斑，少量小出血点，水肿，少量丘疹以及小水疱2~6强刺激性红斑，皮下出血，水肿，有很多小水疱并有可能合并成大水疱，糜烂，表皮剥落，有溃疡形成等>6方法评价皮肤刺激试验的结果不仅与检测技术有关，也与试验过程中的质量控制相关。凡是杀虫剂、杀真菌剂、杀鼠剂以及具有刺激性的兽药等化学物均需进行局部皮肤刺激试验，以保护接触人员的健康。试验药物的量一般以0.5ml或0

8、.5g为宜，评价固体受试化学物时不一定要将其配成溶液，具体可酌情而定。