α-甘露糖苷酶活性在沙眼衣原体侵染细胞中的作用及其诊断价值的研究.pdf

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1、万方数据AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofdoctorTheRoleof0【一MannosidaseActivityinChlamydiaTrachomatis-InfectingCellsanditsDiagnosticValueBy：ZeyuWangSupervisor：Prof．JingCuiPathogenBiologySchoolofBasicMedicalSciencesMay2014万方数据原创性声明本人郑重声明：所呈

2、交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文储互峭了隰纠午年‘月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本

3、学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：互峭彳日期：训垆年‘月日万方数据摘要Q一甘露糖苷酶活性在沙眼衣原体侵染细胞中的作用及其诊断价值的研究博士研究生王则宇导师崔晶教授郑州大学基础医学院病原生物学教研室(郑州450001)摘要伐．甘露糖苷酶(a．mannosidase)是一种糖苷水解酶，在N-连接

4、糖蛋白的合成和加工中具有重要作用。有关a．甘露糖苷酶的研究虽然较多，但研究对象主要集中在真核生物，对原核生物特别是病原原核生物的伐．甘露糖苷酶研究相对较少。随着特异性酶显色技术逐步发展，酶显色技术用于a．甘露糖苷酶活性测定成为可能。沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis)l晦床检测虽然有多种方法，如细胞培养法、免疫学方法、生化方法以及分子生物学方法，但这些方法均存在一些问题，如细胞培养法和胶体金免疫法的敏感性较低，而且细胞培养法不易用于临床，生化方法的特异性不强，分子生物学方法的操作复

5、杂及费时较长等，这些问题已严重影响沙眼衣原体感染的临床检测。’随着显色培养基技术和酶显色技术的发展，酶法快速检测微生物已成为目前临床微生物检测的一个方向。泌尿生殖道常见病原微生物以及沙眼衣原体多数流行株是否有僻甘露糖苷酶以及酶活性如何，将决定静甘露糖苷酶活性对沙眼衣原体临床检测是否有潜在的诊断价值。如果仪．甘露糖苷酶活性可以作为诊断标志物，那么沙眼衣原体c【．甘露糖苷酶的分离提纯、c【．甘露糖苷酶活性对沙眼衣原体侵染细胞是否有影响、这种影响是否有特异性以及以此建立弘甘露糖苷酶活性诊断沙眼衣原体感染方

6、法的性能和能否产品化等问题都值得深入研究。为了详细研究这些问题，本论文共分为以下三个部分来阐明洳甘露糖苷酶活性在沙眼衣原体侵染细胞中的作用及其诊断价值。万方数据摘要第一部分泌尿生殖道常见微生物a-甘露糖苷畴活性研究目的研究泌尿生殖道常见微生物在o【一甘露糖苷酶活性快速检测中所表现活力，以期确定旷甘露糖苷酶活性对临床沙眼衣原体感染是否有快速诊断价值。方法1．以泌尿生殖道常见的微生物包括18种细菌、7种念珠菌、2种支原体和1种原虫共计28株标准菌株和40株临床分离菌株以及2株沙眼衣原体不同血清型标准株进

7、行培养。2．把培养所得的各种微生物分别以离心洗涤和不洗涤的方式收集培养物。3．沙眼衣原体和化脓性链球菌(Streptococcuspyogenes)分别以超声波细胞破碎和不破碎的方式收集培养物，白色念珠菌(Candidaalbicans)分别以冷冻研磨破碎和不破碎的方式收集培养物。4．分别以5．溴．4．氯．3．吲哚．a-D．甘露糖苷和6。氯．3．吲哚．a-D．甘露糖苷作为0【一甘露糖苷酶显色底物，测定各种培养物在370C不同反应时间(10、30和60min)的570nm和512am吸光度。结果1．沙

8、眼衣原体血清型D株对HeLa229细胞侵染率(被侵染的细胞占视野内所有细胞的比率)(18．75％、24．06％和17．65％)低于沙眼衣原体血清型E株对HeLa229细胞侵染率(59．69％、62．96％和53．85％)。经卡方检验，两者侵染率概率分布差异具有统计学意义1(矿=16．273，P<0．05)。2．以5．溴．4．氯．3川I哚．a-I)．甘露糖苷和6．氯．3．吲哚．a-D．甘露糖苷作为旷甘露糖苷酶显色底物，沙眼衣原体血清型D株和E株所呈现的洳甘露糖苷酶活性均