淫羊藿多糖的分离纯化和结构鉴定及生物活性研究.pdf

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1、万方数据SichuanAgriculturalUniversityMasterDisertationExtraction，StructuralCharacterizationandBiologicalActivitiesofPolysaccharidesfromEpimediumacuminatumByChengHao—ranSupervisor：ProfessorDingChun—bangMajor：BotanyYa’an，Sichuan，P．R．C．April，2014万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成

2、果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：径燃如fcf年()月歹日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全

3、部或部分内容。昭采论文不保密。口本论文保密，在一年解密后适用本授权。(请在以上口内戈0。，v”)研究生签名：柽浩乡≮、导师签名：)3秀妁7cf年6月P曰)口／q年G月5日万方数据于两要淫羊藿为小檗科(Berberidacea)淫羊藿属(Epimedium)多年生草本植物的统称，其茎叶可入药，辛温无毒，为中国传统补益中药，具有补肾壮阳，祛风除湿，治疗阳痿，腰膝无力，四肢不仁，半身不遂等药效。现代药理学研究表明，淫羊藿主要活性成分是黄酮类和多糖，具有广阔而显著的药用价值，对心脑血管和肿瘤等重大疾病疗效显著。目前淫羊藿属植物的研究和开发多局限于黄酮类物质，其中总黄酮和淫羊

4、藿苷含量是判断淫羊藿药材质量的标准，而对淫羊藿多糖的研究则相对滞后。研究表明植物多糖生物活性广泛，且毒副作用较小，具有广阔的开发前景。粗毛淫羊藿(EpimediumacuminatumFranch．)因总黄酮和淫羊藿苷的含量较低而未被收录于《中国药典》，但其分布广泛，生物量较高，在四川等许多地方也被当做药材使用，具有较大的开发潜力。本研究以粗毛淫羊藿为对象，分别采用传统热水浸提法、超声波辅助提取法、酶提法和微波辅助提取法四种常规方法提取淫羊藿多糖，探讨提取方法对淫羊藿多糖理化性质和生物活性的影响，并对提取工艺进行优化，旨在提高淫羊藿多糖的提取率、降低提取能耗，最后对

5、淫羊藿多糖进行分级纯化，研究其构效关系，为粗毛淫羊藿多糖的开发利用提供理论基础。主要结果如下：1．分别采用热水法、超声波法、酶法和微波法提取淫羊藿多糖，多糖提取液经乙醚和丙酮洗涤、Sevage法和半透膜透析除去蛋白质和小分子杂质，浓缩干燥后得热水提粗多糖、超声波提粗多糖、酶提粗多糖和微波法提粗多糖。2．采用化学成分分析、红外光谱分析和电镜扫描对四种粗多糖理化性质进行研究。结果表明四种粗多糖的化学成分一致，主要官能团没有差异，均存在结合蛋白，但末端糖苷键构型不同，热水提、酶提和微波辅助提粗多糖均为p．糖苷键，而超声波辅助提粗多糖为a．糖苷键。扫描电镜显示热水提粗多糖和

6、酶提粗多糖表面平整光滑，超声波提粗多糖和微波提粗多糖表面粗糙，凹凸不平且伴有空洞。抗氧化评价结果表明，热水提粗多糖清除DPPH自由基和ABTS自由基能力、还原能力、抑制红细胞溶血能力显著高于另外三种粗多糖。3。对热水浸提法提取淫羊藿多糖工艺进行响应面法优化，采用三因素三水平的中心组和设计，分别进行20组试验，以多糖得率为响应值，建立影响多糖得率的二次多项式数学模型。根据模型，确定了热水浸提法提取淫羊藿多糖的最佳工艺条万方数据件为：料液比为29．61mL／g、提取温度为85．67。C以及提取时间3．57h，实际得率为8．21％。4．对淫羊藿多糖组分进行了分离和结构鉴定

7、。通过酒精梯度分级、阴离子交换层析和凝胶渗透层析将淫羊藿粗多糖分成极性不同、带电荷量不同以及相对分子量不同的三个纯化多糖片段：EAP．40．1、EAP．60．1和EAP．80．2。三个多糖片段的主要化学成分和官能团没有区别，但相对分子量大小和单糖组成不同，EAP．40．1的相对分子量为138kD，主要由葡萄糖和半乳糖组成；EAP．60．1的相对分子量为114kD，主要含葡萄糖和甘露糖；EAP．80．2的相对分子量为65kD，主要单糖组成为半乳糖。5．采用DPPH法、ABTS法、铁离子还原能力、羟基自由基清除试验、红细胞溶血抑制试验和脂质过氧化抑制试验，对三种淫羊