《细胞化学染色》PPT课件.ppt

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1、细胞化学染色检验申家辉1一、概述二、细胞化学染色的基本方法三、临床应用21、概念：细胞化学染色是细胞学和化学相结合而成的一门科学，以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学物质（包括酶类、脂类、蛋白质、糖类、铁、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。3一、概述2.细胞化学染色的目的（1）辅助判断急性白血病的类型（2）辅助血液系统等疾病的诊断与鉴别诊断3.细胞化学染色的基本步骤：包括固定、显色反应、复染。（1）固定：为了保持细胞结构及化学成分的稳定性而选用的方法。根据染色的目的，最常用的固定剂有甲醛、甲醇、乙

2、醇等。5（2）显色：通过不同的化学反应，最终形成稳定的有色沉淀，使被监测的化学物质显示出来。包括偶氮偶联法：如NAP、ACP及各种脂酶染色普鲁氏蓝反应：如铁染色雪夫（shiff）反应：如PAS染色联苯胺法：如POX染色（3）复染：使各种目的细胞能显示出来更便于观察6过氧化物酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色糖原染色非特异性酯酶染色特异性酯酶染色骨髓铁染色7二、细胞化学染色的基本方法1、原理：poxH2O2O联苯胺联苯胺蓝+亚硝基铁氰化钠8蓝黑色颗粒（一)过氧化物酶(POX)染色2.试剂(1)联苯胺酒精溶液：取0.3g联苯胺加亚硝基铁

3、氰化钠饱合液（36%）1ml,再加95%乙醇至100ml，存在于棕色瓶中，可存一年。(2)稀过氧化氢（新鲜配制）：取50ml蒸馏水加30%H2O21滴。（3）瑞吉氏复染液93、染色方法1、新鲜干燥涂片加联苯胺酒精溶液10滴，覆盖整个髓膜，固定1-2min。2、再加等量的稀H2O2，混匀后染色4－5min,勿倒去染液直接流水冲洗。3、瑞氏染液复染。104、注意事项（1）H2O2要新鲜配制，注意有效性（2）标本要新鲜，最长不超过一周，时间长了酶活性减弱。（3）POX染色后，一定要冲洗干净，否则染料堆积或浮于表面，影响瑞氏染色结果观察

4、。115、结果判定：中性粒细胞杆状及分叶核呈强阳性是染色成功的标志(设对照片）。在细胞的胞浆中出现蓝绿色或蓝棕色颗粒为阳性反应。121.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.晚幼红细胞，呈阴性；3.单核细胞，呈弱阳性；4.浆细胞，呈阴性14急性粒细胞白血病（M2a)的POX染色原始粒细胞均呈阳性急性淋巴细胞白血病的POX染色1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；其他原始淋巴细胞均呈阴性急性早幼粒细胞白血病的POX染色１.原始红细胞，呈阴性；其他早幼粒细胞均呈强阳性急性单核细胞白血病的POX染色1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.原始单核细胞，呈阳

5、性；3.原始单核细胞，呈弱阳性；其他原幼单核细胞呈阴性6、临床意义（1）正常分布粒系:早期原粒阴性，晚期原粒及以下各阶段呈不同程度阳性。单核系:早期原单阴性，其它阶段皆呈弱阳性。淋巴、红系、浆细胞、巨核均呈阴性。19（2）急性白血病的鉴别诊断幼稚细胞POX阳性率≥3%：急非淋（AML)幼稚细胞POX阳性率＜3%：急淋（ALL)20（二）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（偶氮偶联法）1.原理磷酸奈酚钠磷酸+萘酚偶联萘酚+重氮盐不溶性有色沉淀物定位于胞浆(坚固蓝RR盐)21NAPPH9.2～9.8222.试剂（1）固定剂：10％甲醛甲醇溶

6、液（2）Tris-Hcl缓冲液的配制：Tris粉〔三胺基甲烷〕4.85克溶于200ml蒸馏水中,加浓HCL1-2滴，PH调至9.2，4℃保存！（3）作用(基质液):磷酸萘酚钠5mgN-N二甲基酰胺1mlTris-Hcl液4ml坚固蓝RR盐5mg（4）复染液：1%中性红3.操作步骤1、新鲜、干燥的外周血或骨髓涂片（标本片及对照片）加固定剂作用30秒（染缸），水洗待干；2、滴加作用液，室温染色15min，水洗待干；3、1%中性红复染1min234.注意事项(1)重氮盐以坚固蓝RR盐为最佳；(2)坚固蓝RR盐应适量：过多易造成染色失败

7、，过少使反应减弱；(3)每次都要做阳性对照；(4)作用液新鲜配制，配好后要立即使用245.结果观察:(对照片成熟中性粒细胞中出现棕黑色颗粒为阳性细胞，说明染色成功)正常人除成熟中性粒细胞NAP可见阳性外，其它血细胞均为阴性。且正常阳性率＜40%，积分值30～130分。256.NAP阳性结果及积分判断标准“－”0分，胞浆中无阳性颗粒“+”1分，胞浆中含有少量颗粒“2+”2分，胞浆中含有中等量颗粒“3+”3分，胞浆中含有丰富的颗粒，但胞核清楚“4+”4分，胞浆中含有丰富粗大的颗粒，但胞核不清楚中性粒细胞碱性磷酸酶染色1.中性成熟粒细

8、胞（+）；2.中性成熟粒细胞（++）；3.中性成熟粒细胞（+++）；4.中性成熟粒细胞（++++）；5.淋巴细胞（-）2829NAP分级7.临床意义增高：细菌感染、类白、AA、急淋、慢粒急变、骨髓增殖性疾病，恶性淋巴瘤。降低：慢粒、急粒、PNH、MDS、恶组30