苦瓜抗白粉病SRAP标记筛选的PCR体系优化与验证.pdf

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1、南方农业学报JOURNAL0Fs0UTHERNAGRIcULTURE2叭3，44(6)：898—902ISSN2095一l19l：CODENNNXAABhttP：／／、ww．nfnyxb．cnDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2013．6．898苦瓜抗白粉病SRAP标记筛选的PCR体系优化与验证米军红t一，尚小红z，3a，周生茂z’3a+，车江旅3，黄如葵2，3”，梁任繁2’3a，文俊丽2，n，郭元元2'3a，梁和1(1广西大学农学院，南宁530005；2广西作物遗传改良生物技术重点开放实

2、验室，南宁5300073广西农业科学院8蔬菜研究所，南宁530007)摘要：【目的】优化苦瓜抗白粉病sRAP标记的PcR体系，为获得苦瓜抗白粉病的sRAP分子标记、加快苦瓜抗白粉病新品种的选育提供参考。【方法】采用正交设计L。。(45)，在已有s＆镭．PcR扩增程序基础上，以苦瓜抗、感白粉病的父母本及其杂交后代基因组DNA为模板，用4对sRAP引物对模板DNA、dNTPs、M矿、引物、AqDNA聚合酶等5个因素浓度进行优化组合和验证。【结果】提取的苦瓜基因组DNA纯度较好，无蛋白质、RNA等物质污染，其纯度和完整

3、性较好。利用引物对ME9．EMl1进行PCR扩增，16个不同因素组合处理在苦瓜父本Mcl8和母本MCl一2的基因组DNA间的扩增结果有明显差异，其中以处理3的sRAP—PcR体系(20．o斗L：DNA5．on∥斗L、dNTPo．05mmol／L、M妒+2。5mmol／L、引物0。6恤mo儿、丁aqDNA聚合酶0．088u／斗L)获得较清晰、较多的扩增条带。用4对引物对验证优化的sRAP．PcR体系，其重复性好，不同苦瓜材料问无明显的多态性。【结论】优化的sRAP，PcR体系适用于苦瓜抗白粉病sRAP分子标记的筛选

4、。关键词：苦瓜；sRAP—PcR；体系优化；筛选；验证中图分类号：s642．5文献标志码：A文章编号：2095一1191(2013)06—0898—05OptimizingandVerificationofPCRsystemforSRAPmarkerscreeningrelatedtopowderydiseaseresistanceinbittermelon(M-onlord蛔曲arantja)MIJun—hong1一，SHANGXiao—hon92，3a，ZHOUSheng—ma02，3”，CHEJiang—l

5、n3，HUANGRu—kui2，3r，LIANGRen—fan2’3a，WENJun—li2⋯，GUOYuan—yuan2⋯，LIANGHel(1A酾culturalCollege，GuangxiUniversity，Nanning530005，China；2GuangxiCropsGeneticandImprovementBiotechn0109yLab，Nanning530007，China；33VegetableResearchInstitute，Guan函AcademyofA刚culturalScienc

6、es，Nanning530007，China)Abstract：【0biective】ThepresentstudvwasconductedtooptimizethePCRsystemofSRAPmolecularmarkerrelatedtoDowdervdiseaseresistanceinbittermelonforprovidingreferenceonbreedingnewbittermeloncultivarsresistanttopowderydisease．【Method】0nthebasisof

7、theknownSRAP—PCRamplificationprocedure，theconcentrationcombinationsofDNAteH卜plate，dN’IPs，M92+，primer，TaqDNApolymerasewereoptimizedandve^6edbyorthogonaldesignL16(45)withthegenomeDNAofpowderydisease—-resistantand—susceptibleparentsusedastemplatesandfourpairprim

8、ers．【Result】TheextratedbittermelongenomicDNAshowedbetterpuritvandinte鲥ty，andhadnopoUutionforproteinandRNA，etc．TheprimerpairME9／EMl1wasusedforPCRampli矗cationandgotobviousdifkrencein16PCRsy