实验4 酵母菌的形态观察, 死活细胞鉴别,微生物测量技术,显微镜直接计数法.doc

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1、实验四酵母菌的形态观察，死活细胞鉴别，微生物测量技术，显微镜直接计数法姓名：李跌听年级专业:08药学节次：周一90节组数：第伍组一、实验目的1.观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；宰握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。2.了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法。3.了解血球计数板的构造和使用方法，学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。二、实验原理美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为

2、无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征2—，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片屮央把5mm长度刻成50等分，或把10伽长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜屮的隔板上（此处正好与物镜放大的屮间物像重蒂）用于测量经显微镜放人麻的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出

3、在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。（目镜微尺）镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将］耐等分为100格，每格长10um,每格长（0.01mm）,是专门用來校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标木是处于同一位置，祁要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放人倍数的放人而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的宾实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放人倍数下校正目镜测微尺，即可求出bl镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标木片，实验四酵母菌的形态观察，

4、死活细胞鉴别，微生物测量技术，显微镜直接计数法姓名：李跌听年级专业:08药学节次：周一90节组数：第伍组一、实验目的1.观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；宰握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。2.了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法。3.了解血球计数板的构造和使用方法，学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。二、实验原理美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有

5、还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征2—，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片屮央把5mm长度刻成50等分，或把10伽长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜屮的隔板上（此处正好与物镜放大的屮间物像重蒂）用于测量经显微镜放人麻的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测

6、微尺每小格所代表的相对长度。（目镜微尺）镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将］耐等分为100格，每格长10um,每格长（0.01mm）,是专门用來校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标木是处于同一位置，祁要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放人倍数的放人而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的宾实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放人倍数下校正目镜测微尺，即可求出bl镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标木片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细

7、胞大小。利用血球计数板在显微镜下肓接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀習的菌悬液(或他了悬液)放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室屮，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的(0.11TUD2),所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数H来换算成单位体积内的微生物总数H。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。屮间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，屮间的大方格即为计数