植物愈伤组织诱导培养基的配制.doc

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1、中—国海洋大学实验报告姓名:课程:马宁专业年级:牛命基地班2009级学号:植物牛•理学实验040212009020题植物愈伤组织诱导培养基的配制一•实验目的1、掌握植物组织培养基母液配制的原则。2、掌握植物MS培养基的配制方法。3、学会使川高压灭菌锅。学会植物纽织含水最、自由水和束缚水含量的测定二•实验原理概念：1.植物组织培养：将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发冇成一完整植株的过程。2.愈伤组织及脱分化、再分化：植物的组织在人工培养条件下，原来已经分

2、化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有纟R织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过稈称为“脱分化作用”。而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官,这一过稈称为“再分化作用”。植物激素在“再分化”过稈屮起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。培养基配置见下表化合物含量mg/L母液吸取母液量ml/L编号浓度mg/ml称量mg配制量mlNH4NO316501331650050025KNOj19003819000KH2PO41703.41700MgS

3、O4.7H2O3707.43700CaCl2.2H2O44028.8440050025ZnSO4.7H2O8.630.864305005MnSO4.4H2O22.32.231115H3BO36.20.62310NaMoO4.2H2O0.2540.251255000.5CuSO4.5H2O0.0250.02512.5CoC12.6H200.0250.02512.5KI0.8350.08341・55005Na-EDTA37.367.4637305002.5FeSO4.7H2O27.85.562780盐酸硫胺素

4、0.17125250.05盐酸毗多醇0.58125250.25肌醇1009201000502.5甘氨酸210150501烟酸0.511125250.25三•主要仪器试剂三蒸水、蔗糖、琼脂、用分析纯试剂：NH4N03、KN03、KH2P04、MgS04・7H20、CaC12・2H20、ZnS04・7H20、MnS04*4H20.H3B03预先配制好的不同纟ft分的培养基母液、2-4D溶液、烧杯、移液管、铁缸了、玻璃棒、手套、加热器等。四•实验操作步月1、母液的配制（教师配好）1）配制母液的好处和原则（1）好

5、处a.可减少每次配制称量药品的麻烦.b.减少极微量药品在每次称量时造成的误差。母液配成10〜100倍,2~4°C冰箱屮保存，用时按比例稀释。（2）原则：按照药品的种类和性质（相似）分别配制，避免形成沉淀。2）实验屮用到的各母液（1）大量元素混合母液：指浓度大于0.5mmol/L的元素，即含N、P^K、Ca>Mg、S等六种盐类的混合溶液，可配成10倍母液。【注意事项】a.各化合物必须充分溶解后才能混合。b.混合时注意先后顺序，特别要将钙离了与硫酸根离了，磷酸根离了错开，以免产生硫酸钙、磷酸钙等不溶性化合物沉

6、淀。c.混合时要慢，边搅拌边混合。（2）微量元素混合母液：指浓度小于0.5mmol/L的元素,即含除Fe以外的B、Mn、6、Zn、Mo、Cl等盐类的混合溶液。一般配成100倍其至1000倍。（3）铁盐母液（4）钙盐母液：必须单独配制，若同其他无机元素混合配成母液，易造成沉淀。（5）有机营养母液：主要是维生素和氨基酸类物质。必须分别配成单独的母液。（）.1、1.0、10mg/mlo（6）植物激素：单独配制成母液。0.1、0.5、l.Omg/mba.IAA.IBA、GA3先溶于少量95%酒精，再加水定容。b.

7、NAA可溶于热水或少量95%的洒精屮，再加水定容。c.2,4-D不溶于水，可用lmolNaOH溶解后，再加水定容。d.KT和6-BA先溶于少量lmol的HC1中，再加水定容。e.玉米素先溶于少量95%酒精中或NaOH,再加水定容。2、MS培养基的配置（1）向洗净的大搪瓷缸加三蒸水至大约400ml；（2）将储存母液按顺序摆放好；（3）按照配方并根据欲配制的总体积，量取各种不同体积的母液；（4）加入2,4-D（2mg/L）；（5）称取加入蔗糖（浓度3%）,调节pH至5.7-5.S【此时可以偏酸抵消加热后的酸度

8、偏差】;（6）加入琼脂®9g/L）加热搅拌溶解，沸腾麻立即端离火源（第一个大气泡从缸底上升顶破泡沫层），趁热分装在100ml的三角培养瓶屮（一般以容器的1/3〜1/4体积为宜），拧紧瓶盖。（7）放入高压蒸汽火菌锅火菌，1.1kg・cm・2,121°C保持15〜20分钟即可。3、培养基的存放经高压灭菌的培养基凝I古I示，宜放在培养室屮预培养3〜5天，若没有污染才可使用。暂时不用的培养基应放置在io°c以下保存，而含有生长调节物质