广西副猪嗜血杆菌病分子流行病学调查.pdf

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1、广西农业科学2010，41（10）：1113-1116GuangxiAgriculturalSciences·1113·广西副猪嗜血杆菌病分子流行病学调查马琳１，谭颖翌２，覃绍敏３，陆芹章２*（１广西动物疫病预防控制中心，南宁５３０００１；２广西大学动物科学技术学院，南宁５３０００５；３广西兽医研究所，南宁５３０００１）摘要：根据副猪嗜血杆菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｐａｒａｓｕｉｓ，Ｈｐｓ）１６ＳｒＲＮＡ（M75065）序列设计１对引物，对从广西９个市２６个地县采集的３０５份病料进行ＰＣＲ鉴定。结果表明，３０５份病料有１４份为阳性

2、，阳性率为４．５９％，扩增片段大小为８２２ｂｐ；经ＳｐｈＩ、ＢａｍＨＩ双酶切进一步鉴定，可以确定检测到的１４份阳性材料均为Ｈｐｓ；将ＰＣＲ扩增产物连接ｐＭＤ１８－Ｔ载体并转化ＤＨ５α感受态细胞，然后进行测序及同源性比较分析，发现１４份阳性材料之间的核苷酸同源性均在９４．５％以上，与国外Ｈｐｓ的核苷酸同源性均在９４．３％以上，说明Ｈｐｓ已在广西发生存在。关键词：副猪嗜血杆菌（Ｈｐｓ）；分子流行病学；ＰＣＲ；广西中图分类号：S852.65+9.5文献标识码：A文章编号：１００２－８１６１（２０10）10－1113－０4Investig

3、ationsonthemolecularepidemiologyofHaemophilusparasuisinGuangxiＭＡＬｉｎ１，ＴＡＮＹｉｎｇ－ｙｉ２，ＱＩＮＳｈａｏ－ｍｉｎ３，ＬＵＱｉｎ－ｚｈａｎｇ２*（1GuangxiCenterforAnimalDiseasePreventionandControl,Nanning530001,China;2CollegeofAnimalScienceandTechnology,GuangxiUniversity,Nanning530005,China;3GuangxiVeteri

4、naryResearchInstitute,Nanning530001,China）Abstract：Inthepresentexperiment,305sampleswerecollectedfromtwenty-sixareasofninecitiesinGuangxi,andapairofprimerswasdesignedtoconductthePCRamplificationofthesesamplesaccordingto16SrRNA(M75065)sequenceofHaemophilusparasuis(Hps)

5、.Of305samples,14sampleswerefoundpositivewith4.59%positiverate,theamplifiedfragmentwasfound822bpinlength.Afterdouble-enzymedigestionmethod,allthe14sampleswerefoundtobelongtoHps.Theampliconwith822bpoflengthwasclonedintopMD18-TvectorandtransformedtoDH5αcompetentcellforcl

6、oning.Thesequencedatawereanalyzedforhomology,andthenucleotideshomologyamong14positivesampleswerefoundtobeover94.5%,and94.3%ascompasedtoabroadsamples.TheseresultsconfirmedtheexistenceofHaemophilusparasuisinGuangxi.Keywords：Haemophilusparasuis(Hps);molecularepidemiology

7、;PCR；Guangxi副猪嗜血杆菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｐａｒａｓｕｉｓ，Ｈｐｓ）是猪在为广西副猪嗜血杆菌病的防控提供理论依据。上呼吸道的一种常在细菌，也是猪纤维素性多发性１材料与方法浆膜炎（Ｇｌａｓｓｅｒ氏病）的病原体。Ｈｐｓ为杆状菌，呈多形性，从球杆菌状到纤细丝状不等，具有荚膜，无芽１．１试验材料孢和鞭毛，革兰氏染色呈阴性，美蓝染色呈两极着病料为２００６年１１月～２０１０年３月从广西９个市２６色［１］。该菌属于猪上呼吸道的正常菌群成员之一，个地县各猪场采集的３０５份疑似病料，包括病猪肺仔猪出生数小时即出现，因此采用早期断奶

8、难以控脏、淋巴结、脾脏、肾脏、脑组织、胸水等；Ｔａｑ!ＤＮＡ制该病［２，３］。近年来，随着我国规模化、集约化猪场聚合酶、ｄＮＴＰｓ、ＤＮＡ分子量标准、蛋白酶Ｋ等购自［８］的发展，副猪嗜血杆菌病已成为养猪生产中的常见ＴａＫａＲａ公司；ＴＳＡ培养基：Ｔ